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酸性橙Ⅱ(Acid Orange Ⅱ)和碱性嫩黄O (Auramine O)作为非食用色素比其他水溶性染料更易染色且不易褪色,但是因为目前尚无这两种非食用色素的国家标准推荐分析方法,因此常被不法商贩违法添加于各类食品中。本研究建立并优化高效液相色谱法同时检测此2类非食用色素的方法,并通过加标回收率的变化分析,对酸性橙Ⅱ和碱性嫩黄O的前处理条件进行研究,同时利用此方法对市场中不同食品进行抽检。主要研究结果如下：1.根据酸性橙Ⅱ和碱性嫩黄O的结构和性质,建立等梯度固定波长高效液相色谱法检测2种非食用色素。对高效液相色谱中色谱柱、柱温、流动相种类及比例、流速、波长等影响因素进行了研究及优化,得到优化后的色谱检测条件为：色谱柱为Kromasil C18(4.6×150mm,5um);流动相为甲醇-50mmol/L乙酸铵溶液(V：V)=50：50;流速：1.0mL/min;检测波长450nm；柱温35℃。在上述条件下,碱性嫩黄O的保留时间为7.632min,酸性橙Ⅱ的保留时间为11.548min,碱性嫩黄O和酸性橙Ⅱ的理论塔板数分别为3021和9084,峰底宽分别为0.477和0.435,分离度分别为5.62和7.11,且峰型正常,无拖尾现象。2.采用超声离心法提取不同食品中的酸性橙Ⅱ和碱性嫩黄O,并应用建立的高效液相色谱法定量测定2种物质的含量,以这2种非食用色素的总加标回收率为指标,考察提取剂种类、超声提取时间、超声次数、固液比、超声温度5个前处理的提取参数,最后用响应面法优化前处理。得到食品中酸性橙Ⅱ和碱性嫩黄O的最佳前处理提取参数为：提取剂为甲醇,超声时间30mmin,超声温度20℃,固液比为1：3,超声次数为3。此条件下实际检测结果为酸性橙Ⅱ回收率90.03%,碱性嫩黄O回收率为87.26%。3.对建立及优化的HPLC同时检测酸性橙Ⅱ和碱性嫩黄O的方法进行方法学评价。分析结果表明：酸性橙Ⅱ在进样量0.025-0.125ug范围内呈良好的线性关系,线性方程为Y=2*106X-1240.1(r=0.9999),最低检出限为0.120ug/kg,精密度为1.19%,在腐竹、黄鱼、榨菜、鸡肉、辣椒粉等5类食品中的重复性实验结果RSD为分别为1.11%、1.98%、1.78%、1.93%、1.80%,日内稳定性RSD为1.18%,在五类食品中的加标回收率实验结果分别为90.47%(RSD1.2%)、 80.53%(RSD1.3%)、88.93%(RSD0.8%)、80.38%(RSD2.0%)、83.10%(RSD=1.8%)。碱性嫩黄O在进样量0.025-0.125ug范围内呈良好的线性关系,线性方程为Y=7*106X-5284.2 (r=0.9996),最低检出限为0.032ug/kg,精密度为1.10%,在腐竹、黄鱼、榨菜、鸡肉、辣椒粉等5类食品中的重复性实验结果RSD为分别为1.47%、1.88%、1.87%、1.85%、1.93%,日内稳定性RSD为0.87%,在五类食品中的加标回收率实验结果分别为102.64%(RSD=1.8%)、84.76% (RSD=1.7%).89.12%(RSD=1.4%)、98.42%(RSD=1.6%)、86.8%(RSD=2.2%)。4.应用本研究建立的高效液相色谱法检测市场上不同食品中违法添加酸性橙IⅡ和碱性嫩黄O的含量。本次抽检样品包括市售以及超市的豆制品(包括腐竹、豆干等)、肉制品(鸡爪、真空包装鸡肉等)、鲜活类制品(黄鱼、真空包装黄鱼等)、调味品(包括辣椒粉、豆瓣酱等)共40份样品,在市售的辣椒粉中检测到酸性橙Ⅱ含量为5.34 mg/kg,在市售的小黄鱼中检测到碱性嫩黄O含量为1.92mg/kg,其余样品中未检测出这两种非食用色素。