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番茄细菌性斑点病是一种严重影响番茄质量和产量的世界性细菌病害,是由丁香假单胞杆菌番茄致病变种[Pseudomonas syringae pv.tomato(Okabe)Young,Dye & Wilkie](PST)引起的。番茄中的抗病基因Pto与病原菌的无毒基因AvrPto互作是研究植物与病原物互作的典型模式系统。本文利用酵母双杂交系统,从感病番茄品种“中蔬四号”中筛选与Pto互作的基因。 我们实验室前期研究发现,感番茄细菌性斑点病的番茄品种“中蔬四号”中存在与Pto完全一致的序列,为探讨感病品种有抗病基因而不抗病的原因进行了本试验。一方面能初步了解感病信号传导途径,另一方面也能了解植物—病原物互作的机理,进一步阐明抗感病机制。 本文(1)根据已知的蕃茄细菌性抗病基因Pto基因序列,合成了上下游引物,通过PCR扩增后,将获得的目的片段构建酵母诱饵表达载体pGBKT7-Pto,从而在酵母双杂交系统中表达诱饵融合蛋白。(2)合成了感细菌性斑点病番茄品种“中蔬四号”诱导表达的ds cDNA,用以表达猎物文库的融合蛋白。(3)将诱饵载体、ds cDNA及猎物载体pGADTT-Rec共转化到感受态的酵母细胞中,进行酵母双杂交筛选,初步筛选到与Pto互作的阳性克隆36个,根据测序结果将其分为16类,有8类与植物中的相应基因序列同源性较高,另外8类在Genbank中没有找到与其同源的序列,为未知功能基因。对所测序列的结构域及ORF进行分析,发现在这些克隆中有含有WD40,Transmembrane,PhBp,RuBisCO四类结构域:所测序列中5类含有ORF。(4)通过分析,没有发现在抗病品种中与Pto直接互作的Pti类蛋白,另外有一阳性克隆45C,与其同源性较高的蛋白对Pto介导的抗病信号传导途径起抑制作用。推测这可能是感病品种中存在抗病基因而不起作用的原因。(5)建立了Pro信号传导途径模型假说。