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目的:
多年来外科及病理学者们一直致力于寻找一种反映恶性肿瘤生物学行为的敏感指标及合理的肿瘤分期方法。对肿瘤芽殖的研究,有助于早期诊断和确定大肠癌生物学行为以及准确分期,进行恰当的治疗,即避免手术不彻底和治疗过度。有助于改善肿瘤患者的预后,不仅可提高患者生存率,同时也提高患者的生活质量。本文通过对以往文献的回顾,筛选出与大肠癌转移浸润相关的CathepsinB和MMP-9作为研究对象,研究前二者在大肠癌组织中的表达水平与芽殖发生强度的相关性,以此筛选大肠癌芽殖细胞的判定标志物。
方法:
本实验研究所用组织来源于2000-01/2001-12中国医科大学肿瘤外科施行根治手术大肠癌患者,共73例,男40例。应用免疫组化法检测大肠癌原位癌组织中CathepsinB和MMP-9的表达水平,根据单个视野着色细胞的数量分为4个表达水平;每张切片的肿瘤芽殖都经3名具有丰富阅片经验的病理学医师进行判定,首先采用低倍光镜(×10倍物镜)细查,其次选择3个最高密度区,再用20倍物镜计数每个区域的芽殖灶数量,以其中数量最多的作为该例肿瘤芽殖的程度,并用强度这个名词代表;根据芽殖强度分为4级:0~5,6~10,11~20,20~。数据采用SPSS13.0进行两个独立样本间的非参数检验,分析CathepsinB和MMP-9与芽殖强度间的相关性。
结果:
CB表达阳性为细胞浆着色成棕色,大多数大肠癌细胞显示弥漫性胞浆染色,或少数在近基底膜侧的胞膜部有线状或点状浓集。MMP-9除肿瘤细胞的细胞质染色外,间质中纤维母细胞、巨噬细胞以及内皮细胞着色,有些大肠癌细胞阴性表达,而间质细胞呈明显阳性表达。在计数阳性细胞时,我们只计数肿瘤细胞,而不考虑间质细胞。经免疫组化对目的蛋白表达水平分级,结果显示CB、MMP-9在组织中的阳性率分别为47%、68.5%。对73例大肠癌组织标本进行芽殖强度判定结果显示:芽殖强度1~5,42例;芽殖强度为6~10,17例;芽殖强度为11~20,11例;芽殖强度>20,3例。免疫组化结果显示CathepsinB的表达水平与大肠癌芽殖强度相关性分析无统计学意义(P=0.172);MMP-9的表达水平与大肠癌芽殖强度相关性分析无统计学意义(P=0.305);CathepsinB与MMP-9的综合表达水平与大肠癌芽殖强度相关性分析有显著统计学意义(P=0.043)。
结论:
CathepsinB和MMP-9的单独表达与大肠癌的芽殖发生强度无显著相关性,而CathepsinB和MMP-9的联合表达与大肠癌的芽殖发生强度呈显著的正相关性,二者的表达可增加大肠癌的芽殖强度,因此综合二者的表达情况可作为芽殖判定的标志物群。这为筛选芽殖细胞分子标志物提供了直接依据,并为芽殖阻断提供了候选治疗靶点。