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目的：构建pET32a-EgAgB8/1原核表达载体和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2原核表达载体,并诱导表达和纯化细粒棘球绦虫EgAgB8/1重组抗原和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合抗原,比较两个重组蛋白对囊型包虫病(CE)的血清学诊断价值。方法：从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板,用基因特异性引物分别扩增EgAgB8/1和EgAgB8/2基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此两条基因片段为依据,扩增EgAgB8/1抗原编码核酸序列和人工合成EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列,分别克隆至pMDl8-T载体,测序鉴定其正确性。通过对pMD18-T/EgAgB8/1重组质粒和pMD18-T/EgAgB8/1-EgAgB8/2重组质粒分别进行双酶切,将获得的EgAgB8/1抗原编码核酸序列和EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列,用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确性后,转化至E.coli BL21 (DE3) LysS,IPTG诱导pET32a-EgAgB8/1和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2原核表达质粒,表达和纯化EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白,用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白,并通过超声裂解法进行纯化,Western blot法分别检测两个重组蛋白与中间宿主CE病人的血清学反应情况。结果：测序表明,EgAgB8/1抗原编码核酸序列和EgAgB8/1-EgAgB8/2嵌合抗原编码核酸序列均正方向插入至pET32a(+)质粒。SDS-PAGE电泳分析显示,细粒棘球绦虫pET32a-EgAgB8/1和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2原核表达质粒得到成功的诱导表达,分别在蛋白分子量约28kDa和38kDa处有表达条带,通过超声裂解法获得了纯化的重组蛋白。Western blot结果表明,EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白均能被CE病人血清特异性的识别。16例CE病人血清中,EgAgB8/1重组蛋白11例呈阳性反应,EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋白13例呈阳性反应。同时,用EgAgB8/1和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋白检测12例囊虫病人的血清,EgAgB8/1重组蛋白出现5例阳性反应,EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋自出现3例阳性反应。结论：成功构建了pET32a-EgAgB8/1原核表达质粒和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2原核表达质粒,诱导表达和纯化出EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白,Western blot结果表明,EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白对囊型包虫病的血清学诊断价值优于EgAgB8/1重组蛋白。