【摘 要】
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近年来,利用基因工程手段建构出新的基因工程菌株,通过微生物大规模发酵生产重组溶菌酶,对其产业化具有重要的意义。本课题采用山东大学构建的一种甲醇诱导型产鸡溶菌酶重组
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近年来,利用基因工程手段建构出新的基因工程菌株,通过微生物大规模发酵生产重组溶菌酶,对其产业化具有重要的意义。本课题采用山东大学构建的一种甲醇诱导型产鸡溶菌酶重组毕赤酵母菌株NCY-2的麦芽汁发酵液为研究对象,进行离心、超滤、离子交换处理,优化了蛋清溶菌酶的分离纯化工艺参数,得到的浓缩液,真空干燥制得溶菌酶粉末,研究了重组溶菌酶干酶粉的酶学性质,结果如下:（1）超滤条件的优化:采用30 kDa的聚醚砜（PES）膜,优化出最佳条件:跨膜压力为0.20 MPa、pH 6.5,重组溶菌酶的收率为96.6%,酶活为2612.1 U·mL-1,是原酶活的1.78倍。（2）离子交换条件的优化:采用D152树脂吸附、洗脱,优化最佳的工艺条件:树脂用量占料液体积比为15%,吸附时间4 h,洗脱液浓度为1.0 mol·L-1,重组溶菌酶的酶活回收率为95.7%,酶活为3879.6 U·mL-1,提高了0.5倍,是原酶活的3.1倍。（3）酶学性质的研究:重组溶菌酶干酶粉对溶壁微球菌有抑制效果,酶活为12573.6 U·mg-1;最适温度50℃,2060℃范围内热稳定性好;最适pH 6.5;重组溶菌酶的酶活会被Fe2+、Fe3+、Zn2+和Cu2+抑制,而Na+和Mg2+对酶活有激活作用;还能被司班80抑制,被吐温20、吐温80和甘油激活。
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