目的:BUC（Bladder urothelial carcinoma，膀胱尿路上皮癌）是膀胱癌的主要类型，约占膀胱癌的90％,是泌尿系统常见恶性肿瘤之一。近年来有报告显示BUC的发病率逐年增高，加上它复发率高，已经严重威胁我国居民健康，同时也带来巨额的医疗花费。现有的治疗手段，包括手术治疗及辅助放化疗等效果都十分有限，探索新的高效特异治疗方法成为目前研究的重点。近年来miRNA(microRNA)作为一类具有基因调节作用的非编码微小RNA被证实在BUC的产生和发展中有非常重要的影响，使得miRNA可能成为BUC新的辅助早期诊断的标记物以及治疗靶点，同时在辅助分级、判断预后等方面有着潜在的重要意义。我们在前期的实验中发现了部分miRNAs在BUC中有意义的异常表达。其中miR-29b-1在浸润性BUC和非浸润性的BUC均表达上调，浸润性BUC和非浸润性的BUC比较有6个miRNAs(miR-378、miR-29c、miR-200a、miR-200c、miR-429、miR-141)表达上调，1个miRNA(miR-451)表达下调，提示这些特异的miRNA可能在膀胱尿路上皮的发生和浸润中起重要作用。而对4种膀胱癌细胞系(EJ、T24、5637、BIU-87)进行RT-PCR验证其中5个差异表达miRNA(miR-200a、miR-200c、miR-429、miR-141、miR-451)的表达水平，发现它们在T24细胞系中与在BUC中异常表达水平完全一致。本实验选取其中的miR-29b-1、miR-29c，miR-451在膀胱癌T24细胞系中做进一步的功能研究。探索这些miRNAs对膀胱癌T24细胞的活性和增殖的影响，揭示这些miRNAs在膀胱癌的形成和发展中潜在的作用机制。　　材料与方法:　　一.细胞培养.　　购置膀胱癌T24细胞系、人肾胚T细胞系(293T)，正常膀胱尿路上皮细胞系(HU609)（吉凯基因化学公司），并以DMEM细胞培养液培育。　　二.Real-time PCR验证。　　1、收集生长良好的T24、HU609细胞，用Trizol试剂提取总RNA。2。用紫外线分析法测定RNA质量。3.逆转录RNA获得cDNA。4、Real-time PCR检测目标基因表达水平。5、数据分析。　　三、转染　　1、构建携带目标miRNAs干扰基因的慢病毒(pGCsil-H1-CMV-GFP)载体。2、阳性克隆的PCR鉴定。3、用293T细胞包装慢病毒形成慢病毒重组体，并用孔稀释法测定滴度。4、T24细胞中转染慢病毒重组体及转染效率测定。　　四.MTT比色法分析细胞增殖　　用MTT比色法对四组处于对数生长期的实验组（空细胞对照组、转染阴性对照慢病毒细胞组、转染miR-29b-1基因RNAi慢病毒细胞组、转染miR-29c基因RNAi慢病毒细胞组）进行连续5天的细胞增殖情况分析。　　结果:　　1.Real time PCR验证结果显示:T24细胞中miR-29b-1和miR-29c表达水平相比于正常组分别为:3.47倍和4.40倍，验证结果与先前试验中的BUC组织表达情况一致。而miR-451的表达丰度过低，不满足检测。　　2.MTT比色法显示:转染阴性对照慢病毒细胞组相比于对空细胞对照组细胞增殖受到轻度抑制;而转染miR-29b-1、miR-29c基因RNAi慢病毒细胞组相比于染阴性对照慢病毒细胞组相和空白对照组细胞增殖均受到明显抑制，前者抑制效果更明显。　　结论:　　1.Real time PCR验证结果显示在T24细胞系中miR-29b-1、miR-29c上调的水平与前期实验中组织表达结果是一致的。因此基于T24细胞的关于这两个miRNAs的功能研究的体外实验可以为研究他们在BUC中的作用提供重要参考。由于miR-451在T24细胞中表达丰度过低而无法确定其表达变化情况。　　2.本实验应用慢病毒作为目标基因miR-29b-1和miR-29c干扰的载体效果良好。　　3.细胞增殖MTT法分析显示通过RNA干扰降低miR-29b-1、miR-29c的表达均能引起T24细胞的增殖抑制。提示miR-29b-1、miR-29c可能在膀胱癌中起致癌作用。　　4.本实验证实了miR-29b-1和miR-29c对恶性程度高的膀胱癌T24细胞的生长的影响，关于他们在尿路上皮癌中的具体作用机制还需要进一步的实验研究。