FOXP3（Transcription factor forkhead box protein3）是Tregs细胞标志性分子，它赋予了调节性T细胞免疫抑制功能[1-2]。近来研究显示FOXP3也表达于多种肿瘤细胞[3]。有文献报道FOXP3通过上调p21的表达，在乳腺癌中发挥为抑癌作用[4]；但在胰腺癌中发挥促进肿瘤免疫逃逸的作用[5]，表明FOXP3在肿瘤中的功能存在条件依赖性。本课题组前期研究发现在胃腺癌组织和多种肿瘤细胞系中也存在FOXP3的表达。并且内源性FOXP3在胃癌组织和细胞中存在差异分布。提示FOXP3在胃癌演变过程中可能扮演重要角色。研究表明，炎症微环境可改变肿瘤细胞中基因表达和功能，炎性微环境是胃癌演变的重要因素[6-7]。对胃癌的发生、发展有重要影响。NF-κB参与了炎症的生理和病理过程， TNF-α—NF-κB信号通路是重要的炎症激活途径[6-7]。有文献报道，在HEK293细胞中存在FOXP3与NF-κB的相互作用[8]。那么，胃癌炎性环境中的NF-κB是否也存在与FOXP3的相互作用？这种相互作用如何影响FOXP3对肿瘤的调控作用？其具体机制又是什么？深入探讨上述问题将为FOXP3在肿瘤细胞中发挥不同功能提供新的解释，为胃癌微环境导致基因功能改变提供新实验证据。为此，本课题在前期工作的基础上，进行了如下工作：首先，通过用免疫组化、激光共聚焦、Realtime PCR、免疫印迹实验在胃癌组织和多种胃癌细胞系中研究FOXP3的表达，研究其定位与表达与分化的关系。其次，我们采用慢病毒建立稳定过表达FOXP3的胃癌细胞系，探讨FOXP3对胃癌细胞增殖及周期的影响及其下游靶基因p21转录和表达的影响。包括（1）采用siRNA技术，通过流式细胞术、MTT实验证明胃癌细胞系中, FOXP3通过p21依赖的途径抑制胃癌细胞AGS的周期和增殖；（2）通过Realtime PCR、Western blot实验检测过表达FOXP3后p21mRNA和蛋白表达的变化；再次，我们探讨TNF-α介导的炎性条件，对FOXP3的抑癌功能及其下游靶基因p21转录和表达的影响。包括（1）通过流式细胞术、MTT实验检测多种胃癌细胞系中，炎性和非炎性条件下过表达FOXP3后对胃癌细胞周期及增殖的影响。（2）Realtime PCR、Western blot实验检测在TNF-α介导的炎症环境下，过表达FOXP3后p21的mRNA和蛋白的变化。最后，我们通过以下实验研究炎性微环境影响FOXP3功能的分子机制：⑴采用Co-IP、激光共聚焦技术检测TNF-α介导的炎症环境对NF-κB与FOXP3的相互作用及共定位情况的影响；⑵在共转染FOXP3和p65的细胞及单转染FOXP3或p65的细胞中，通过Realtime PCR和Western blot实验比较p21基因和蛋白的变化；⑶根据文献报道的FOXP3在p21promoter的最佳结合位点，设计了ChIP实验用的realtime PCR引物，通过ChIP实验，检测炎性条件下对FOXP3作用其下游靶基因p21启动子的影响。通过以上实验技术和方法我们获得了以下的实验结果：①FOXP3在胃癌组织及细胞中均有表达，且和分化程度成正相关；在胃癌AGS细胞株中FOXP3通过上调p21的表达，来发挥其抑癌功能；②TNF-α介导的炎症逆转了FOXP3对胃癌细胞AGS的周期及增殖抑制；TNF-α介导的炎症也减弱FOXP3对p21的上调；③在AGS细胞中，TNF-α介导的炎性环境使NF-κB与FOXP3在细胞核内的相互作用增强；TNF-α介导的炎性环境，拮抗了FOXP3在其下游靶基因的p21的启动子上的结合。