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目的:1探索以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的重组质粒电穿孔胰腺癌Sw1990细胞的高效转染参数。2利用电穿孔转基因法将shRNA重组质粒载体转染胰腺癌Sw1990细胞,观察shRNA表达载体对胰腺癌Sw1990细胞Livin基因表达的影响以及对Sw1990细胞生长的抑制作用,为进一步研究胰腺癌的基因治疗探索实验基础。方法:1胰腺癌Sw1990细胞和转化了重组质粒的大肠杆菌E.coli DH5α的培养及质粒的提取;2实验分为空白对照组、pGenesil-1.1-Livin-473组、pGenesil-1.1-Livin-771组和pGenesil-1.1-NC组进行实验。3通过脉冲电压、脉冲时间、细胞生长状态等三个主要条件的不同组合,采用电穿孔法将重组质粒转染Sw1990细胞,用荧光显微镜和流式细胞仪观察转染率。4在转染48h时测定细胞凋亡和Livin mRNA相对含量,以观察各干扰重组质粒对Livin基因表达的抑制作用;5 G418筛选获得各重组质粒的稳定转染Sw1990细胞,流式细胞仪测定各组重组质粒稳定转染率,RT-PCR测定Livin mRNA的表达,细胞计数测定细胞的增殖能力。结果:1传代后第二天的Sw1990细胞在脉冲电压260 V ,脉冲时间20mS得到最佳转染率(55.86±2.14)%,荧光显微镜下可观察到被转染目的基因的细胞发出绿色荧光;2瞬时转染48h,pGenesil-1.1-Livin-473组和pGenesil-1.1-Livin-771组的凋亡指数分别是空白对照组的4.09和3.61倍(与对照组相比,*P<0.05),对Sw1990细胞Livin基因表达的抑制率分别为47.62%和32.91%(与对照组相比,*P<0.05);3 G418成功筛选出各重组质粒稳定转染的Sw1990细胞,流式细胞仪测得各组稳定转染细胞百分率均达98%以上;pGenesil-1.1-Livin-473和pGenesil-1.1-Livin-771对Sw1990细胞Livin mRNA的抑制率分别为72.86%和46.51%,与对照组相比差异具有显著性意义(*P<0.05);对各组细胞增殖速度的比较表明,两干扰组稳定转染细胞的增殖能力明显下降;4稳定转染实验结果表明:pGenesil-1.1-Livin-473组对Livin基因的干扰作用较pGenesil-1.1-Livin-771组明显,抑制癌细胞的增殖也更明显;而pGenesil-1.1-NC对Sw1990细胞Livin基因无明显干扰作用,对癌细胞的增殖无明显影响。结论:1成功筛选出Livin shRNA重组质粒电穿孔人胰腺癌Sw1990细胞的最佳电转参数。2两干扰重组质粒能干扰Sw1990细胞Livin基因表达,抑制胰腺癌Sw1990细胞增殖;5’-GGAAGAGACUUUGUCCACA-3’和5’-GCGCCGUGUCCAUCGUCUU-3’可作为胰腺癌Sw1990细胞Livin基因的RNAi靶点。