多环芳烃(PAHs)在栉孔扇贝体内蓄积特征与毒性效应的研究

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多环芳烃(PAHs)是指含有两个或两个以上苯环的碳氢化合物,主要来源于有机物的热解或不完全燃烧,作为一种持久性有机污染物,是最早被发现和研究的致癌化合物之一。(chrysene,CHR)是一种四环结构的PAH化合物,与苯并[a]蒽(BaA)、苯并[a]芘(BaP)、苯并[b]荧蒽(BbF)3种PAHs同时被列入欧盟食品安全标准(EC835/2011)中,作为PAHs限量的评价标准。本论文选择我国沿海重要经济贝类栉孔扇贝(Chlamys farreri)为研究对象,研究了PAHs对不同发育阶段栉孔扇贝累积含量、解毒代谢酶和相关基因以及损伤效应的影响,初步探讨了PAHs蓄积规律和毒性效应,筛选用于海洋PAHs污染评价的生物标志物,也为评价PAHs对海洋生物毒性效应、保障水产品质量安全和监测海洋环境PAHs污染提供理论基础。1.3种PAHs对栉孔扇贝稚贝蓄积毒性效应的研究本章研究了栉孔扇贝(Chlamys farreri)稚贝在BaP、BbF和CHR胁迫下累积含量和损伤效应,比较了3种PAHs蓄积毒性效应。染毒浓度设置为对照组、BaP(0.01、0.2、4μg/L)、BbF(0.02、0.2、2μg/L),CHR(0.2、0.8、3.2μg/L),分别在1、3、6、10、15、21d取稚贝软体部测定3种PAHs累积含量和脂质过氧化(LPO)水平、蛋白质羰基(PC)含量和DNA链断裂(F值)等损伤指标。结果表明:除低浓度BaP、BbF处理组外,其他处理组软体部PAHs含量在实验时间内呈逐渐升高趋势,呈现时间-剂量效应性,在同一染毒浓度(0.2μg/L)下,3种PAHs累积含量大小为CHR>BbF>BaP。BaP和BbF中、高浓度组以及CHR各处理组软体部LPO水平在15d内呈峰值变化,于6d或10d时达到最大值,15d后保持稳定,恢复或显著高于对照组;BaP和BbF中、高浓度组以及CHR各处理组软体部PC含量均在21d内呈升高趋势,BaP低浓度组PC含量与对照组无明显差异,BbF处理组PC含量仅在6d时显著升高;BaP和BbF中、高浓度组以及CHR各处理组F值在10d或15d内呈峰值变化,在6d或10d时达到最小值,10d或15d后保持稳定,恢复或明显低于对照组,而BaP和BbF低浓度组在21d内F值与对照组无明显差异。3种PAHs在同一染毒浓度(0.2μg/L)下稚贝的损伤效应均表现为BaP>BbF>CHR。由此可见,3种PAHs的毒性顺序为BaP>BbF>CHR;依据3种PAHs累积含量与损伤效应指标之间的相关性分析,稚贝PC含量可作为3种PAHs海洋PAHs污染评价的生物标志物。2.对栉孔扇贝成贝蓄积毒性效应的研究本章研究了性腺成熟期栉孔扇贝成贝对CHR蓄积规律、解毒代谢和抗氧化酶(AHH、EROD、GST、SOD)及相关关键基因(AhR、ARNT、CYP1A1、GST-pi、Cu/Zn-SOD)和生物大分子损伤指标(LPO水平、PC含量和DNA链断裂)的影响,探究了CHR对栉孔扇贝的蓄积毒性效应。染毒浓度设置为对照组、0.2、0.8、3.2μg/L,在1、3、6、10、11、15和21d时(其中10d取样后刺激扇贝产卵/排精)分别取雌雄扇贝鳃丝、消化盲囊、闭壳肌、血淋巴、性腺(卵巢、精巢)和软体部,测定CHR累积含量以及鳃丝和消化盲囊解毒代谢指标,鳃丝、消化盲囊和性腺损伤指标。结果表明:CHR对雌雄个体组织中CHR累积含量、解毒代谢酶及相关基因和生物大分子损伤指标影响显著,消化盲囊组织比鳃变化明显,而对照组无明显差异。栉孔扇贝雌雄个体CHR蓄积规律大致相同,除闭壳肌外,其他各组织中CHR含量均呈现雌性>雄性,产卵/排精后各组织内CHR含量显著降低。鳃和消化盲囊中解毒代谢和抗氧化酶(AHH、EROD、GST、SOD)及相关关键基因(AhR、ARNT、CYP1A1、GST-pi、Cu/Zn-SOD)等指标在雌雄个体之间变化趋势不尽相同,其中鳃和消化盲囊内AhR和ARNT基因具有相似的表达模式,并表现出剂量效应;代谢酶活性与相关基因存在相似的趋势,在产卵/排精前均被显著诱导,而在产卵/排精后,高浓度组中雌性个体EROD、GST、CYP1A1基因、GST-pi基因以及雌雄个体SOD、Cu/Zn-SOD基因在实验后期受到显著抑制。生物大分子损伤指标变化显著,在鳃丝和消化盲囊内具有类似趋势,而在性腺中变化较为复杂。由此表明,栉孔扇贝成贝组织内CHR累积含量顺序为鳃丝>性腺>消化盲囊>软体部>闭壳肌,产卵/排精是一种重要的清除体内PAHs的方式,AhR和ARNT基因在CHR胁迫下表现出良好的剂量效应,可作为评价PAHs污染的候选标志物,初步说明CHR具有一定的生殖毒性。
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