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梨是河北省的主产水果之一,在国内外享有盛誉,但近年来,老果园普遍发生病树、死树现象,给果农造成了巨大损失,对果区的持续发展产生了威胁。研究表明,这与土壤退化,老龄梨树发生根腐、线虫危害和不发根等有关。采用根际有益微生物修复老果园土壤退化问题是有效方法之一。链霉菌TOR3209是一株多功能根际益生菌,有显著的促生、抗病、抗虫、耐盐、解除根系毒素危害等作用,以该菌株为核心开发的生物肥料已在赵县、晋州等老梨区应用,收到了快速激发新根、恢复树势、产量和品质显著改善的效果,深受果农欢迎,但该菌发挥作用的生态学机制尚不清楚,亟待深入研究。本文以链霉菌TOR3209为试验材料,重点研究了该菌对不同生长时期梨树可培养内生和根际细菌群体结构和密度的影响,同时对“响应细菌”进行了功能鉴定。本实验采用可培养方法,以树龄30年以上的黄冠为试验对象,以TOR3209生物肥为试验材料,在老果园构建根际土壤模型,分别在开花期、坐果初期、成熟期和落叶期,从梨树的毛细根、主根、枝条和根际土壤中分离内生和根际细菌;采用16S rDNA分析方法,对获得的菌株进行分类鉴定,研究分析细菌群体结构及种群密度的动态变化;采用培养基平板检测方法,对获得的菌株进行拮抗病原真菌、解有机磷、溶无机磷、固氮、产嗜铁素和产IAA等生物功能的检测;对优势菌株进行了生物测定。通过研究获得如下结果:1.在不同生长时期,从梨树的不同组织内共分离获得421株细菌,分属38个属,80个种,其中芽孢杆菌属有21种;短芽孢杆菌属4种;类芽孢杆菌属3种;假单胞菌属7种;短小杆菌属3种;微杆菌属4种;普罗威登斯菌属2种;土壤杆菌属2种,其他菌株34种。其中,菌株Q223和Q479的16S rDNA序列与相近细菌的相似度都为97%,可能是两株细菌新资源。2. TOR3209介入梨树根系后,对不同生长时期,不同组织可培养内生和根际细菌的群体结构多样性、密度和功能菌的数量都产生了显著影响。(1)内生菌总量都大幅度提高,其中以落叶期的提高幅度最大,毛细根、主根和侧枝内生细菌及根际细菌总量分别提高了650.80%、122.22%、122.93%和611.54%,与其他时期比较达极显著水平(p<0.01)。(2)内生菌种群多样性显著增强。在落叶期,TOR3209处理的主根、毛细根内生细菌和根际细菌的种类分别提高了40%、100%和28.57%。其他时期的增幅不显著。(3)不同组织内的腐生葡萄球菌、萎蔫短小杆菌等人畜和植物条件致病菌数量显著减少。(4)不同组织中具有不同功能有益细菌的数量显著增加,主根中拮抗菌、解有机磷、固氮、产IAA和产铁载体的功能内生细菌数量分别提高了36.59%、57.14%、38.46%、21.95%和60.61%;毛细根中的拮抗菌及产铁载体细菌分别提高了40.74%和31.71%;侧枝的拮抗菌提高了28.57%。有益细菌数量的增加,对减轻根系、枝叶和果实上的病害,快速恢复树势都十分有利。3.以冬小麦种子为实验材料,进行了幼苗促生试验。发现了具有明显促生功能的菌种6株,其中5株来自于TOR3209处理的梨树组织。这5株细菌包括:巨大芽孢杆菌Q207、巨大芽孢杆菌Q210、巨大芽孢杆菌Q408、枯草芽孢杆菌Q410和蕈状芽孢杆菌Q452。这些菌株可使小麦种子提早发芽4h以上;使整株鲜重、整株干重、根系鲜重和根系干重分别提高26.35%、33.81%、20.83%和31.26%以上。