【摘 要】
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目的:研究骨髓瘤细胞自噬与血管新生的关联及其机制。方法:采用不同浓度的SMER28和3-MA处理RPMI 8266和U266细胞,CCK-8法检测其对骨髓瘤细胞存活率的影响,应用Western Blot检测自噬相关蛋白的表达,选取最佳干预浓度进行后续实验。SMER28和3-MA处理MM细胞后,应用Western Blot法检测Bach1相关蛋白及血管生成因子（VEGFA）表达的影响,荧光显微镜下观
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目的:研究骨髓瘤细胞自噬与血管新生的关联及其机制。方法:采用不同浓度的SMER28和3-MA处理RPMI 8266和U266细胞,CCK-8法检测其对骨髓瘤细胞存活率的影响,应用Western Blot检测自噬相关蛋白的表达,选取最佳干预浓度进行后续实验。SMER28和3-MA处理MM细胞后,应用Western Blot法检测Bach1相关蛋白及血管生成因子（VEGFA）表达的影响,荧光显微镜下观察细胞内ROS的产生情况,ELISA检测骨髓瘤上清VEGFA的浓度,Matrigel小管形成实验观察骨髓瘤细胞培养上清对HUVEC的小管形成能力。最后,我们使用SMER28联合N-乙酰半胱氨酸（NAC）处理骨髓瘤细胞,荧光显微镜下观察细胞内ROS产生情况,Western Blot检测细胞Bach1、VEGFA的表达。结果:SMER28和3-MA处理MM细胞后,CCK8结果显示它们均会使细胞存活率降低,随着浓度的加大、时间的延长,细胞存活率更低。不同浓度的SMER28和3-MA处理MM细胞,Western blot检测显示SMER28使LC3Ⅱ/Ⅰ水平升高,使P62蛋白表达降低,呈剂量依赖效应,3-MA呈现的作用相反。我们选择作用最佳的浓度进行后续实验,Western Blot检测结果表明,SMER28使MM细胞Nrf2、Bach1、P62、HO-1和VEGFA表达显著减少,提示其促进自噬,抑制Bach1及VEGFA表达;而3-MA使MM细胞Nrf2、Bach1、HO-1和VEGFA表达显著增多,提示其抑制自噬,增加Bach1及VEGFA的表达（P<0.05）。ELISA检测结果表明,SMER28处理的MM细胞培养上清VEGFA浓度显著降低,3-MA处理的MM细胞培养上清VEGFA浓度显著升高（P<0.05）。Matrigel小管形成实验显示,SMER28处理的MM细胞培养上清使HUVEC小管形成数量显著减少,而3-MA处理的MM细胞培养上清使HUVEC小管形成数量显著增多（P<0.05）。荧光显微镜下检测结果表明,SMER28组产生ROS水平较对照组明显增多,而3-MA组较对照组产生ROS水平明显减少（P<0.05）。NAC处理MM细胞后,荧光显微镜下观察ROS结果表明,NAC能够降低对照组及SMER28组MM细胞内的ROS水平（P<0.05）。Western Blot结果表明,NAC能够稳定SMER28组Bach1的表达,促进VEGFA的表达（P<0.05）。结论:1.MM细胞自噬水平与血管新生存在密切联系,自噬水平升高抑制血管新生能力。2.Bach1可能是连接MM细胞自噬和血管新生的重要分子。3.MM细胞自噬水平升高,线粒体ROS增加可能降低Bach1的表达。
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