【摘 要】
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研究人员用真核表达载体pcDNA构建了小鼠GM-CSF的表达质粒.先用PCR方法扩增小鼠GM-CSF的cDNA,引物设计时将原cDAN5端前165bp(含第一个AUG和5起始处一个茎-环结构)去掉,3端引
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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研究人员用真核表达载体pcDNA<,3>构建了小鼠GM-CSF的表达质粒.先用PCR方法扩增小鼠GM-CSF的cDNA,引物设计时将原cDAN5端前165bp(含第一个AUG和5起始处一个茎-环结构)去掉,3端引进EcoRI酶切位点.将PCR产物补平后装入pUC119质粒SmaI酶切位点,然后再用BamHI和EcoRI双酶切下装入pcDNA<,3>载体.用电穿孔法将构建的载体导入了RMA细胞,经G<,418>筛选和限制性稀释法克隆化后,用RT-PCR、骨髓造血祖细胞增殖实验和造血祖细胞集落形成实验挑选出了相对高表达克隆RMA-GM.此细胞克隆皮下接种同基因小鼠后,出瘤时间略有延长;丝裂霉素处理灭活后免疫小鼠,可刺激小鼠产生较强的抗肿瘤免疫保护力,表现为亲代肿瘤细胞攻击后肿瘤生长速度减慢,小鼠生存期明显延长.用基因枪注射pcDNA<,3>-GM-CSF于小鼠腹部皮肤,24小时 后于注射部位接种FBL-3细胞反复冻融裂解物,可激活小鼠产生有效的特异性抗肿瘤免疫应答反应.此方法有可能成为一种简便有效的肿瘤免疫治疗方法.
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