β2肾上腺素能受体(β2 Adrenergic receptor,β2AR)属于GPCR家族,广泛存在于动物机体的平滑肌上,与肾素分泌、糖原分解相关。鉴于β2AR的相关生物学效应,人们将β2受体激动剂作为食品动物的饲料添加剂使用,以求起到增加瘦肉率、减少脂肪沉积、提高饲料转化率等作用。因此也就带来了β2受体激动剂的残留问题。我国作为生猪养殖大国,β2受体激动剂的残留检测有着十分重要的公共卫生安全的意义。现有的残留检测手段以色谱法和免疫学方法为主,但这些方法无法应对混合应用(鸡尾酒效应)及目前层出不穷的新型β受体激动剂的残留检测。受体分析残留检测方法是近年来发展的可以应对受体类药物残留的一种新型残留检测手段,目前已经成功应用于如β-内酰胺类等兽用药物的残留检测,具备检出限低、灵敏度高、检测耗时短等优势。而针对β2受体激动剂的受体分析残留检测方法的研究尚且处于起步探索阶段,因此本试验旨在寻找合适的受体模型以供受体分析残留检测方法所使用,为今后从事β2受体激动剂的受体分析残留检测方法的研究奠定基础。本研究首先构建了猪的β2肾上腺素能受体(β2AR)基因及其突变体真核表达载体,并鉴定其在HEK293T细胞中的表达。本研究从猪基因组DNA克隆猪β2AR基因野生型,利用同源重组技术将其连接至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-β2AR真核表达载体,加入myc标签后命名为myc-pcDNA3.1(+)-β2AR。以真核表达载体为模板构建突变体β2AR-D130N、β2AR-C285S和β2AR-D130N/C285S,并将构建的各真核表达载体转染入HEK293T细胞,利用Western blot技术验证其表达。结果显示,猪β2AR基因已正确重组入pcDNA3.1(+)载体中;经测序鉴定,猪β2AR的第130位天冬氨酸和第285位半胱氨酸分别成功突变为天冬酰胺和丝氨酸。并经Western blot证明所构建的表达载体均可在HEK293T细胞中表达。在验证所构建的猪β2AR基因野生型和突变体的表达载体可以顺利表达后,本研究进行了对其部分药理学活性的探究。本研究先将前述构建的猪β2AR基因野生型和突变体表达载体转染入HEK293T细胞中,再用不同的β2受体激动剂(异丙肾上腺素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇)和β2受体拮抗剂(普萘洛尔)分别以高(10-6M)、中(10-8M)、低(10-10M)三个不同浓度进行孵育,24h后进行裂解,提取蛋白进行Western Bolt检测相关信号通路蛋白表达水平。结果表明,随着加入的激动剂(拮抗剂)的量的增加,各受体相关信号通路蛋白表达水平均出现相应的变化,在异丙肾上腺素刺激下,D130N突变体与野生型活性相类似;在盐酸克伦特罗和沙丁胺醇刺激下,则表现为强于野生型的活性。而C285S和双点突变的突变体则表现出弱于野生型的活性;在普萘洛尔刺激下,同样得出相类似的结果。本研究成功构建了猪β2AR野生型的真核表达载体及两个单点突变和一个双点突变的突变体,并验证其在HEK293T细胞中正常表达。在药理学特性研究中,通过对不同β2AR对于不同β2受体激动剂和拮抗剂作用下,MAPK和PKA部分通路相关蛋白变化的研究,发现突变体D130N处于一个相对来说易被活化的状态,对于激动剂刺激所产生效应较为灵敏,因此相比较本研究所涉及到的其他三种β2AR,该突变体可能会更加适合用于β2受体激动剂受体分析残留检测方法。