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目的观察卡格列净对db/db小鼠肾组织细胞凋亡的影响,探讨卡格列净对高糖培养下肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制。方法1.体内实验,选取8周龄雄性C57BLKS/J db/db小鼠与同周龄C57BLKS/J小鼠,适应性饲养1周后,动物分为6组,C57BLKS/J小鼠作为正常对照,并将db/db小鼠随机分为:糖尿病模型组、卡格列净低、中、高剂量组（10、20、40 mg/kg/d）以及厄贝沙坦组（20 mg/kg/d）,持续灌胃12周。监测小鼠血糖、体重,计算肾重/体重,并检测小鼠尿白蛋白/肌酐、血清尿素氮、肌酐及血脂,HE、PAS染色观察小鼠肾脏病理变化,TUNEL染色分析小鼠肾组织细胞凋亡情况,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bc12、Cleaved-caspase-3表达水平。2.体外实验,应用不同浓度（1、2.5、5、10、20 μmol/L）卡格列净干预高糖培养下的HK-2细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western Blot检测增殖和凋亡变化;通过生信分析并结合lncRNA芯片数据,选取与凋亡密切相关的lncRNA CO9,对HK-2细胞用正常糖、高糖、高糖+卡格列净处理后,通过实时荧光定量PCR法验证其表达。根据开放阅读框及密码子替换频率预测CO9编码性,荧光原位杂交明确CO9亚细胞定位。临床糖尿病肾病患者与非糖尿病患者肾脏样本验证CO9表达。对HK-2细胞分别转染CO9小干扰RNA及过表达质粒,Western Blot与流式细胞术检测各组细胞凋亡变化。结果1.与正常对照相比,db/db小鼠空腹血糖、体重、尿白蛋白/肌酐、血清尿素氮、血肌酐、总胆固醇及甘油三酯均显著增加,肾重/体重显著降低（P＜0.05）;与模型组相比,低、中、高剂量的卡格列净干预后均可显著降低小鼠空腹血糖（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,而体重变化无统计学差异（P＞0.05）,厄贝沙坦组空腹血糖、体重无明显变化（P＞0.05）;卡格列净组与厄贝沙坦组尿白蛋白/肌酐、血肌酐均降低（P＜0.05）,卡格列净中、高剂量组甘油三酯降低（P＜0.05）,卡格列净各组与厄贝沙坦组尿素氮、总胆固醇稍降低,低剂量卡格列净组与厄贝沙坦组甘油三酯稍降低,但无统计学意义（P＞0.05）。2.HE、PAS染色结果显示,模型组小鼠肾小球肥大,肾小管上皮细胞萎缩,基底膜增厚,系膜基质增生,卡格列净与厄贝沙坦组均可减轻上述肾损伤。TUNEL染色结果显示,模型组较正常组肾组织细胞凋亡数明显增加,而卡格列净组与厄贝沙坦组较模型组凋亡数减少（P＜0.05）。蛋白质印迹结果提示模型组小鼠促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase-3表达上调,抗凋亡蛋白Bc12表达下调,Bax/Bcl2比值增加（P＜0.05）,卡格列净组显著下调Bax、Cleaved-caspase-3的表达,降低Bax/Bcl2（P＜0.05）,厄贝沙坦组可降低Bax蛋白表达（P＜0.05）,Bax/Bcl2 与 Cleaved-caspase-3 水平无明显变化。3.细胞CCK-8实验显示高糖抑制HK-2细胞活力,且呈浓度时间依赖性,1-10 μmol/L卡格列净促进细胞增殖,20μmol/L卡格列净对细胞增殖产生抑制。蛋白质印迹结果显示,与正常糖组相比,高糖促进Bax、Cleaved-caspase-3 表达,抑制 Bcl2 表达（P＜0.05）。卡格列净组较高糖组 Bax、Cleaved-caspase-3表达降低（P＜0.05）,Bc12水平无明显变化,Bax/Bcl2比值降低（P＜0.05）,且2.5μmol/L抑制效果最显著。Annexin V-FITC/PI流式细胞术结果显示,以NG组为对照,高糖刺激的HK-2细胞的凋亡率明显增加,而卡格列净干预后细胞凋亡率下降（P＜0.01）。4.基于lncRNA芯片数据进行CNC分析筛选与凋亡相关的lncRNAs,实时荧光定量PCR结果显示,与正常糖组HK-2细胞相比,高糖组lncRNA CO9水平增高,卡格列净干预后较高糖组下降。CNC、GO分析及KEGG pathway分析显示,lncRNA CO9主要生物过程集中在细胞周期、胰岛素信号通路、、Hippo信号通路、凋亡等通路。开放阅读框及密码子替换频率示CO9无蛋白编码功能。荧光原位杂交证实CO9主要定位于细胞质。实时荧光定量PCR结果显示,糖尿病肾病患者肾脏组织中CO9表达较非糖尿病患者增加（P＜0.05）。5.高糖培养的HK-2细胞转染CO9小干扰RNA,流式细胞术结果显示细胞凋亡率下降,蛋白质印迹结果显示Bax、Cleaved-caspase-3表达下降,Bcl2表达增高（P＜0.05）。高糖处理细胞并转染CO9过表达质粒后,细胞凋亡率上升,Bax、Cleaved-caspase-3表达增高,Bcl2表达降低（P＜0.05）。高糖与卡格列净同时处理HK-2细胞并转染过表达质粒后,与高糖+卡格列净组相比,细胞凋亡率下降,Bax、Cleaved-caspase-3表达均下调,Bc12表达上调（P＜0.05）。结论1.卡格列净可缓解db/db小鼠肾组织细胞凋亡;2.卡格列净可改善高糖诱导的HK-2细胞凋亡,其作用机制可能与抑制lncRNA CO9表达有关。