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垂体腺瘤是下丘脑—垂体系统最常见、最重要的内分泌肿瘤，也是最常见的颅内肿瘤之一。对垂体腺瘤的现代综合治疗，不仅要求切除肿瘤，防止复发，解除临床症状，而且要求达到生物学上的治愈。但目前仍有部分垂体腺瘤尤其是大腺瘤、侵袭性腺瘤难以完全切除，即使手术后采取放疗和／或药物治疗，垂体功能仍不能恢复正常，甚至肿瘤复发；有些患者虽然对溴隐停等药物治疗敏感，但有一定副作用，更存在长期用药的不便。上述存在的问题是目前垂体腺瘤治疗的难点，尚未得到解决，有待研究更加有效的治疗方法。 临床实践和实验研究证明，多巴胺(DA)或多巴胺激动剂，如溴隐停可以通过激活多巴胺受体途径，使垂体泌乳素(PRL)瘤体积缩小和分泌PRL降低。酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)是多巴胺合成的限速酶，若用携带TH基因的表达载体转染PRL瘤细胞，使肿瘤细胞自身表达TH增加，在充足的作用底物(酪氨酸)和协同因子(四氢生物蝶呤，BH4)存在下，将促使多巴胺合成量增加，以达到治疗PRL瘤的目的。 基于上述思路，我们提出了以大鼠PRL瘤为模型进行腺病毒介导TH基因治疗大鼠PRL瘤实验研究的课题，经过申请后该课题获得国家自然科学基金资助。本研究即为该课题的一部分，包含两部分内容： 一．应用293细胞内同源重组法和细菌内同源重组法分别构建了携带大鼠THcDNA的复制缺陷性5型腺病毒载体Advth和pAd-GFP-TH： 1．应用传统的293细胞内同源重组法构建了复制缺陷型腺病毒Advth。先将TH cDNA克隆至穿梭质粒p△E1sp1A，然后与腺病毒基因组质粒pJM17混合通过脂质体介导共转染至293细胞，在293细胞内同源重组产生E1区缺失型重组腺病毒Advth。经大量空斑筛选、PCR和免疫组化方法鉴定，该载体正确整合了TH基因并能表达TH蛋白。这种方法需要进行大量的空斑筛选，鉴定过程繁琐，存在成功率低、费时费力和实验周期长等缺陷。