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溴代阻燃剂因可裂解溴自由基而成为性能优秀的阻燃产品,而传统溴代阻燃剂如五溴、八溴联苯醚(Brominated diphenyl ethers,BDE)和六溴环十二烷(Hexabromocyclododecane,HBCD)等被列为持久性污染物逐渐被淘汰,替代型溴代阻燃剂应运而生。其中,2,3,4,5-四溴苯甲酸2-乙基己酯(2-Ethylhexyl2,3,4,5-Tetrabromobenzoate,TBB)和双(2-乙基己基)四溴邻苯二甲酸酯(Bis(2-ethylhexyl)tetrabromophthalate,TBPH)是五溴BDE的替代品,1,2,5,6-四溴环辛烷(1,2,5,6-Tetrabromocyclooctane,TBCO)是HBCD的替代品。监测数据显示,TBB,TBPH和TBCO在各种环境介质中广泛分布,在水中TBB和TBPH测得ng/L水平,TBCO也有检出。鉴于三种新型溴代阻燃剂可能长期存在于环境中,而目前针对三者长期暴露对生物造成的毒性的相关研究较缺乏,需要补充相关研究,以更加全面的评估三者的毒性。在毒性评估中,生殖毒性因其关系到生物个体的生长和种群的延续而显得至关重要。性腺的发育和分化直接影响生物生殖功能。以斑马鱼为代表的鱼类其性别由环境和基因共同决定,性腺在受精后发育,跨幼年(受精10天后,10dpf)直到成年(90dpf)的重要生命阶段,中间经历雌雄分化重要窗口期(25-45dpf),若有污染物作用,其性腺分化方向和发育程度可能改变。因此,需要建立斑马鱼性腺发育过程的动态影响方法,可在评估污染物可能的生殖毒性的同时研究其干扰相关内分泌活动的作用通路。本文开展了TBCO,TBPH和TBB斑马鱼的开食到性成熟连续暴露(10-90dpf)实验,分别设置0.01μM,0.1μM和1μM三个浓度,旨在实现以下目标:(1)在90dpf暴露终点处研究TBCO,TBPH和TBB对斑马鱼生长、性别比例、以及性腺组织发育等影响;(2)在性腺发育和分化的关键时间节点25dpf和45dpf探索性激素、卵黄蛋白原水平以及相关基因表达的变化,阐释它们影响斑马鱼性腺分化和发育的通路。经过80天的暴露,TBCO和TBB均对斑马鱼的性腺发育和雌雄比例造成了影响,而TBPH未造成显著影响。1μM TBCO暴露下雌雄斑马鱼性腺指数均降低,0.1μM TBCO暴露导致雌性斑马鱼比例显著升高。1μM TBB暴露下雌雄斑马鱼性腺指数均升高,0.01μM和0.1μM TBB暴露均导致雄性斑马鱼比例显著上升,1μM浓度暴露导致雌性斑马鱼比例显著升高。组织层面研究发现:随着TBCO暴露浓度升高,雌雄鱼性腺内成熟生殖细胞比例逐渐降低,性腺发育延迟;0.1μM和1μM TBPH暴露后,雌鱼卵巢中卵母细胞卵黄颗粒堆积增加,卵巢发育受到促进,而雄鱼受到的影响不显著。TBB暴露未对斑马鱼性腺生殖细胞发育造成显著影响。在25dpf和45dpf窗口期研究发现:TBCO暴露下,斑马鱼体内雌激素相对于雄激素的比例显著升高,与雌激素合成相关的基因表达上调,与性别分化相关的基因调控偏向雌性化方向,而在1μM浓度下雌激素和卵黄蛋白原水平不足以支撑雌性斑马鱼的性腺成熟过程,且与性腺成熟相关基因表达下调,导致雌雄斑马鱼性腺发育延迟。0.01μM和0.1μM TBB暴露下雌激素相对于雄激素的比例显著降低,且卵黄蛋白原水平显著降低,与雄激素合成相关基因表达上调,与性腺分化相关的基因表达均呈现雄性化方向,而在1μM浓度下与雌激素合成相关基因表达上调,基因表达呈现雌性化模式。TBPH暴露下斑马鱼体内雌雄激素比例未发生明显改变,且与性腺分化相关基因表达未受到明显影响,但是促进性腺发育和成熟的基因明显上调,进而促进了卵母细胞的发育。综上所述,在斑马鱼性腺发育期,通过干扰内分泌相关通路,新型溴代阻燃剂TBCO,TBB暴露会影响其性腺分化,而TBCO和TBPH的暴露会影响其性腺成熟,之后可能会影响其生殖过程和种群构成。应对新型溴代阻燃剂予以持续的关注,以更好的监测和控制其对生态系统的风险。