相思藤水提物对肝损伤的作用及机制研究

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第一部分相思藤的主要化学成分分析目的:对相思藤的化学成分进行初步检识,鉴定相思藤中是否含有甘草酸和甘草苷,并测定其中总黄酮的含量。方法:(1)应用化学反应的方法对相思藤水提物和醇提物进行检识,确定其中化学成分的类别。(2)分别采用薄层色谱法、高效液相色谱法对甘草酸和甘草苷进行定性和定量分析。(3)采用分光光度法对总黄酮进行含量测定。结果:(1)相思藤中主要含有苷类或多糖、有机酸、酚类、氨基酸、黄酮、蛋白质、甾体或三萜类皂苷。(2)相思藤中不含甘草酸和甘草苷。(3)相思藤中总黄酮的含量约为0.27%。结论:相思藤含有黄酮等多种化学成分。第二部分相思藤水提物对急性肝损伤的作用目的:研究相思藤水提物的解酒作用及对酒精、四氯化碳(CCl4)、对乙酰氨基酚(AP)、D-半乳糖胺(D-GalN)所致小鼠急性肝损伤的作用及机制。方法:(1)分别给予各组小鼠高(APLH)、中(APLM)、低剂量(APLL)的相思藤水提物、海王金樽片(HWJZT)和生理盐水,连续6天。第6天药后30min开始,每20min给予一定剂量白酒1次,直至小鼠死亡。观察醉酒(翻正反射消失)潜伏期、醉酒时白酒摄入量、死亡时间和死亡时白酒摄入量。(2)分别以酒精、四氯化碳、对乙酰氨基酚、D-半乳糖胺诱导小鼠急性肝损伤,通过检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)的含量,观察相思藤水提物对急性肝损伤的影响。结果:(1)在给予白酒前预先给予APLH,小鼠醉酒的潜伏期延长(P<0.05)。(2)在各种类型的急性肝损伤中,APLH能明显降低肝损伤小鼠血清的AST、ALT活性(P<0.01);此外,还能显著提高肝组织中SOD、GSH、 GSH-PX、ADH和ALDH的活性(P<0.05或P<0.01),并降低MDA含量(P<0.05)。结论:相思藤水提物有一定的解酒作用,对四氯化碳等引起的小鼠急性肝损伤也具有保护作用,可能与其清除自由基,抑制脂质过氧化有关。第三部分相思藤水提物对慢性酒精性肝损伤的作用目的:研究相思藤水提物对大鼠慢性酒精性肝损伤的作用及其机制。方法:采用高度白酒长期灌胃制备大鼠慢性酒精性肝损伤模型,于造模同期给予相思藤水提物进行干预,每日给酒给药各1次,连续24周。24周后各组大鼠进行如下处理:(1)处死大鼠,采集血清及肝组织,检测血清和肝组织中ALT、AST、SOD、MDA、GSH、GSH-PX、ADH、ALDH的含量。(2)分别取每只大鼠的肝组织,用10%中性甲醛溶液固定,24小时后常规石蜡包埋,用于苏木素-伊红(HE)染色及免疫组织化学染色。(3)以实时定量逆转录聚合酶链反应(Q-PCR)检测肝组织中β-连环蛋白(β-Catenin)、细胞周期素D1(CyclinD1)、Ⅰ型胶原(Col-I) mRNA的表达,免疫组织化学法检测β-Catenin蛋白的表达。结果:(1)APLH能显著降低慢性酒精性肝损伤大鼠的肝脏指数,血清和肝组织中ALT、AST的活性及MDA的含量;提高血清和肝组织中SOD、GSH、GSH-PX、ADH、ALDH的活性(P<0.01或P<0.05)。(2)APLH能减轻肝细胞变性坏死,使肝细胞结构基本恢复正常。(3)APLH能不同程度地下调β-Catenin、CyclinD1、Col-I mRNA和β-Catenin蛋白的表达。结论:相思藤水提物对大鼠慢性酒精性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与提高肝脏清除自由基的能力,并抑制肝细胞中β-Catenin、CyclinD1、Col-I的表达有关。
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