下调LMNA基因对斑马鱼早期造血发育影响的研究

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Leechen17008
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目的:本课题通过设计针对 LMNA基因的LMNA-Morpholino,显微注射入斑马鱼胚胎,下调LMNA基因的表达,利用原位杂交及实时荧光定量PCR的方法检测与造血发育相关的转录调控因子的变化,以期了解下调LMNA基因对斑马鱼早期造血发育的影响。  方法:利用显微注射的方法将 Morpholino注入斑马鱼胚胎,用 Western Blot的方法检测野生型的斑马鱼与注入LMNA-Morpholino的斑马鱼体内LMNA蛋白的表达差异。若 LMNA-Morpholino注入后 LMNA蛋白的表达量降低,说明LMNA-Morpholino可以有效的下调 LMNA蛋白的表达。收集野生型的相应时相斑马鱼胚胎作为对照组,收集显微注射LMNA-Morpholino的相应时相斑马鱼胚胎作为实验组,利用原位杂交及实时荧光定量PCR的方法从基因水平检测LMNA基因下调后斑马鱼中不同造血发育相关的转录调控因子的变化。  结果:Western Blot结果显示野生型斑马鱼体内LMNA蛋白有两个条带,大小分别为69KD和62KD。显微注射入LMNA-Morpholino的斑马鱼体内LMNA蛋白也表达相同大小的两个条带,但是表达水平明显降低。说明LMNA-Morpholino可以有效的下调LMNA蛋白的表达。原位杂交和实时荧光定量PCR的结果显示,显微注射 LMNA-Morpholino的相应时相的实验组斑马鱼胚胎较之对照组的野生型斑马鱼胚胎相应造血转录调控因子的表达有所下降。  结论:1,野生型斑马鱼体内有LMNA基因的表达。  2,LMNA-Morpholino可以成功下调斑马鱼体内LMNA基因的表达。  3,LMNA基因下调后,相应造血转录调控因子的表达有所变化。
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