论文部分内容阅读
红景天甙是中草药红景天中的一种主要有效成分。本研究目的是证实红景天甙对皮肤光老化有保护作用,探讨紫外线辐射后,皮肤成纤维细胞凋亡率的变化及红景天甙干预作用的效果和可能机理。皮肤光老化是由于长期目光中的紫外线辐射(UVR)造成的,主要与真皮胶原蛋白的过度降解及弹性蛋白的不规则沉积有关,而胶原蛋白是由成纤维细胞合成的,因此皮肤光老化与成纤维细胞的损伤与凋亡关系密切。研究紫外线辐射后成纤维细胞的生物学性状变化和红景天甙的干预作用,在预防皮肤光老化的发生中具有重要意义。本研究分二个部分探讨了红景天甙对体外培养的成纤维细胞在UVB、UVA辐射下的干预作用,及其可能的分子机制。目的第一部分:从细胞生长形态和细胞凋亡率上,探讨红景天甙对体外培养的成纤维细胞在UVB、UVA辐射下的干预作用。第二部分:从分子生物学角度,探讨体外培养的成纤维细胞经UVB、UVA辐射后,红景天甙对细胞凋亡的干预作用及可能的分子机制。方法1．观察成纤维细胞经UVB、UVA辐射后细胞生长形态变化以及加入红景天甙的影响;采用流式细胞仪检测对照组及实验组成纤维细胞凋亡率的变化;探讨红景天甙对成纤维细胞经UVB、UVA辐射后生长情况的干预作用;2．通过RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas和Bcl-2 mRNA表达的变化,探讨红景天甙抑制细胞凋亡与凋亡相关基因的关系;3．通过RT-PCR法检测TNF-α及IL-1β的mRNA表达,探讨红景天甙抑制细胞凋亡与凋亡相关细胞因子的关系;4．应用比色法检测Caspase3、8,探讨红景天甙对细胞凋亡信号传导中Caspase通路的影响。结果1．UVB、UVA辐射成纤维细胞后,细胞出现解体、排列紊乱、脱颗粒现象;加入红景天甙后,体外培养成纤维细胞未出现明显的数量上和形态学改变;红景天甙在最终浓度为200 ug／m1时,从细胞数量和形态上观察,体外培养成纤维细胞经UVB、UVA照射未出现明显的改变。体外培养的成纤维细胞经UVB、UVA辐射后,出现明显的凋亡峰,凋亡率升高;应用红景天甙后凋亡率下降。表明红景天甙对成纤维细胞由紫外线引起的凋亡具有保护作用。2．成纤维细胞Fas mRNA表达在UVB、UVA辐射组均有增加;应用红景天甙后,表达减弱。Bcl-2 mRNA表达经UVB、UVA辐射后减弱,应用红景天甙后,表达增强。表明红景天甙可以通过影响成纤维细胞Fas和Bcl-2的表达而发挥对紫外线引起细胞凋亡的保护作用。3．UVB、UVA辐射体外培养的成纤维细胞后,TNF-α及IL-1β的mRNA表达比正常对照组增加;应用红景天甙后,TNF-α及IL-1β的mRNA表达降低。表明红景天甙减轻紫外线引起的皮肤光老化及炎症反应发生,与抑制TNF-α和IL-1β两者mRNA表达有关。4．UVB、UVA辐射体外培养的成纤维细胞后,Caspase3、8活性均增高;应用红景天甙后,Caspase3、8活性均降低。表明红景天甙减轻紫外线引起的皮肤光老化及炎症反应发生,与抑制Caspase通路中Caspase3、8活性有关。结论从细胞形态学上观察,UVB、LIVA辐射对皮肤成纤维细胞具有明显的损伤作用,红景天甙有保护作用。红景天甙做为一种对抗紫外线辐射的保护剂,其作用机理与细胞凋亡Caspase通路密切相关,可以通过抑制中Caspase3／8活性升高、下调Fas mRNA表达、上调Bcl-2 mRNA表达、减少TNF-α及IL-1β的mRNA表达而发挥作用,从而达到抑制相应的信号传导,抑制UVB、UVA辐射造成的细胞凋亡,保护成纤维细胞,发挥延缓皮肤光老化的作用。