目的通过无血清培养技术（Serum free medium,SFM）培养人甲状腺未分化癌8505C细胞株,建立CD133⁺/CD44⁺表型甲状腺癌干细胞（Thyroid cancer stem cells,TCSC）的体外模型,分析其分子生物学特性,为实验提供研究平台;检测盐霉素（Salinomycin,SAL）对甲状腺癌干细胞增殖与凋亡的调节作用,初步探讨盐霉素通过Wnt/β-catenin信号通路诱导甲状腺癌干细胞凋亡的分子生物学机制。方法1.制备甲状腺癌干细胞体外模型:甲状腺未分化癌8505C细胞株用无血清培养基和完全培养基（Complete medium,CM）进行培养,在倒置显微镜下观察细胞形态、和生长方式的变化并拍照记录;应用免疫荧光法、流式细胞仪（Flow cytometry,FCM）检测甲状腺癌干细胞表面标志物CD133⁺、CD44⁺的表达差异;应用流式细胞仪检测甲状腺癌干细胞的细胞周期变化及富集率。2.盐霉素诱导甲状腺癌干细胞CD133⁺/CD44⁺表型的凋亡情况,初步探讨其分子生物学机制:CCK-8法检测盐霉素对甲状腺未分化癌8505C微球细胞增殖的影响;PI单染法检测盐霉素对甲状腺未分化癌8505C微球细胞周期的作用情况;细胞形态学和Annexin V/PI双标法检测盐霉素对甲状腺未分化癌8505C微球细胞凋亡的影响;Western blotting技术检测Caspase-3、PARP、Bax、β-catenin四种凋亡相关蛋白表达水平的变化情况。结果1.无血清培养的细胞以大小不等的微球形式悬浮生长,细胞呈游离状态;完全培养基培养的细胞呈单层附着贴壁生长。与普通贴壁生长的甲状腺未分化癌8505C细胞相比,悬浮细胞静止期（G1）细胞数目增多,活跃期（S）细胞数目减小;CD133⁺及CD44⁺分子,在悬浮细胞中的表达含量均增高;CD133⁺/CD44⁺表型的甲状腺癌干细胞在贴壁和悬浮细胞中的比例为14.91%±2.75%和80.78%±1.57%。2.盐霉素对甲状腺未分化癌8505C微球细胞的增殖抑制作用呈药物浓度和作用时间依赖性。回归分析得出盐霉素作用48h时的IC₅₀为8.76±1.97μM。甲状腺未分化癌8505C微球细胞经盐霉素处理后,倒置显微镜下观察示微球体逐渐解聚,密度降低,细胞出现水肿、固缩、碎裂等凋亡征象。PI单染法显示甲状腺癌干细胞凋亡的过程中可能伴有细胞周期的改变。Annexin V/PI双标法检测显示细胞凋亡率随盐霉素浓度的增加而增大。Western blotting技术检测显示,随盐霉素浓度的增加,甲状腺未分化癌8505C微球细胞中Caspase3、Bax、β-catenin蛋白的表达升高,PARP蛋白的表达下降（P<0.05）。结论1.无血清培养技术使甲状腺未分化癌8505C细胞株的细胞形态及生长方式发生变化,使细胞周期由S G1转变,从而富集到有效的CD133⁺/CD44⁺表型的甲状腺癌干细胞。2.盐霉素有效抑制甲状腺癌干细胞的体外增殖,并且能够诱导其凋亡的发生,其诱导凋亡的作用可能与Caspase-3、PARP、Bax、β-catenin多个蛋白间互相调节有关,盐霉素可能通过Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,导致CD133⁺/CD44⁺表型的甲状腺癌干细胞凋亡的发生。