肌球蛋白X在神经轴突生长和导向中作用的研究

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本文利用构建的肌球蛋白X(MyoX)和系列缺陷型表达载体转染NG108-15细胞,过表达MyoX-F1和头部结构域的NG108-15细胞产生大量丝足,且丝足数目与长度明显增加,过表达MyoX-tail蛋白的细胞几乎没有丝足,细胞呈现圆球状,内源性肌球蛋白X在NG108-15细胞的边缘表达量很高。在离体培养的小鼠大脑皮层神经细胞中,内源MyoX与DCC在神经细胞中分布几乎一致,Netrin-1诱导神经细胞后,神经轴突出现大量分支,且肌球蛋白X与DCC仍然具有共定位现象。进一步,将构建的MyoX和系列缺陷型表达载体与pFlag-DCC或pFlag-neogenin共转染:HEK 293T细胞,利用Protein-G进行免疫共沉淀分析,研究肌球蛋白X与DCC或neogenin之间的相互作用情况。结果表明,DCC和neogenin是通过与肌球蛋白X的尾部区相互作用的,MyoX参与了Netrin-1介导的神经轴突导向过程。另外,体外培养的嗅球外植体被用来探讨:MyoX在神经细胞迁移中的作用,培养50小时的外植体,即有大量的神经细胞从外植体向周围迁移,而在培养基中添加MyoX的抗体阻断神经细胞迁移的过程,证明MyoX抗体抑制了神经细胞的迁移。综上所述,MyoX的头部区对细胞丝足的生长是重要的。MyoX与DCC共定位和相互作用,表明MyoX参与了神经细胞轴突导向的Netrin-1-DCC信号通路,并且是神经细胞的迁移中重要的影响因素。
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