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目的:1.研究针刺激活下丘脑室旁核CRH相关神经元电活动的穴位特异性,遴选出特异性穴位;2.以电刺激肾神经激活的下丘脑室旁核区特异分泌CRH相关神经元的放电情况为指标,明确针刺强度和该神经元被激活的量-效关系;3.明确针刺激活该神经元的神经信息传递通路。通过对以上问题的研究,进一步探讨针刺激活下丘脑室旁核参与应激反应神经元(CRH相关神经元)的调控机制及效应机制。对临床针灸调节机体内环境的平衡,增强对外界变化适应能力的选穴,提供可能有别于传统概念的、全新的指导性选穴原则,提高临床疗效。方法:实验用雄性成年SD大鼠,172只。采用神经电生理学方法,胞外记录下丘脑室旁核应激反应相关神经元电活动。1.将记录到的神经元单位电活动进行靶神经元鉴定:对热刺激增强、静脉注射氢化可的松抑制、睾酮轻微抑制、雌激素无反应的神经元即为下丘脑室旁核靶神经元;2.以电刺激肾神经使记录的靶神经元放电增加20%的刺激量为指标,观察分别针刺不同部位的33个穴位对下丘脑室旁核同步记录的43个参与应激反应靶神经元的激活效应及强度差异,遴选了特异性相关穴位,并分析了特异性相关穴位与所属经脉及脊髓神经节段支配的相关性;3.通过观察损毁脊髓后针刺特异性相关穴位,观察CRH相关神经元的电活动,判断针刺的应激效应是通过哪种传递途径将信息传导到下丘脑的,揭示穴位产生的效应与何种感觉和何类传入纤维有关。结果:1.本项研究在172只雄性SD大鼠下丘脑室旁核共记录到653个神经元单位电活动,实验从121个兴奋性神经元单位中选择了47个静脉注射氢化可的松,发现有43个神经元参与了应激反应,并能够被氢化可的松抑制,结合下丘脑CRH神经元的生理特性,这些神经元单位电活动被认为与CRH神经元电活动有相关性,为本项研究的靶神经元单位。2.以电刺激肾神经使记录的神经元放电增加20%的刺激量(电流强度为1mA)为阈刺激量,并以阈刺激量的不同倍数(0.5、1、2、3倍)的刺激量分别电针刺激肾俞穴(特异性相关穴位),观察到电针电流强度设定为2mA时,刺激肾俞穴激活的靶神经元放电增加20%,该刺激量被认为电针激活靶神经元的最佳刺激量。3.观察电针刺激的33个穴位,靶神经元电活动效应增加20%的穴位共有24个穴位,其激活效应的顺序为:肾俞膀胱经)、期门(肝经)、肝俞(膀胱经)>京门(胆经)、大椎(督脉)>日月(胆经)、章门(肝经)>耳甲(Auricular concha region,ACR)>阳陵泉(胆经)、腹哀(脾经)、水沟(督脉)、命门(督脉)>太冲(肝经)、内关(心包)、膻中(任脉)、天枢(胃经)、风池(胆经)、足三里(胃经)、三阴交(脾经)>神门(心经)、大横(脾经)、商曲(肾经)、外关(三焦经)、中脘(任脉),其中肾俞、肝俞、期门、京门、日月、章门、大椎及耳甲为特异性相关穴位;肝经、胆经、督脉为特异性相关经脉,膀胱经的相同神经节段效应较明显(主要是背俞穴效应)。4.实验选择了11个下丘脑室旁核CRH相关神经元,观察了损伤对侧脊髓背索(T4-T6),分别针刺肾俞、期门,对该神经元的激活效应较损伤前相对减弱(177.0834.12(n=8),148.1621.32(n=7));选择了10个下丘脑室旁核CRH相关神经元,观察了损伤对侧脊髓背外侧索(T4-T6),分别针刺肾俞、期门对该神经元的激活效应,(电活动为114.3512.06(n=9),105.1110.27(n=8));选择了8个下丘脑室旁核CRH相关神经元,观察了横断脊髓(T4-T6)后,分别针刺肾俞、期门CRH相关神经元的激活效应(电活动为54.139.13(n=7),41.108.43(n=6))。结论:1.针刺能够激活下丘脑室旁核参与应激反应神经元(CRH相关神经元)电活动。2.针刺激活下丘脑室旁核CRH相关神经元具有穴位特异性,经脉特异性。不同部位相同经脉及不同经脉相同或相邻神经节段支配的穴位激活效应不同,提示针灸临床选穴既要考虑穴位所在经脉,又要参考穴位的神经节段支配。值得关注的是针刺对应激反应的调控相关经脉的局部穴位效应更明显。3.针刺激活CRH相关神经元的信息传递与脊髓背外侧索关系密切。背外侧索的上行纤维主要来自伤害性感受器的细纤维(细的有髓A纤维和无髓C纤维末梢)。