【摘 要】
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在真核细胞中,内质网是一个完整的膜结构,它由片层状内质网和管状内质网共同构成。管状内质网呈现三维网络状结构,内质网的同源膜融合对于维持这种三维网络状结构非常重要。在后
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在真核细胞中,内质网是一个完整的膜结构,它由片层状内质网和管状内质网共同构成。管状内质网呈现三维网络状结构,内质网的同源膜融合对于维持这种三维网络状结构非常重要。在后生动物细胞中介导内质网同源膜融合的蛋白是Dynamin家族成员Atlastin(ATL),在酵母中起该作用的蛋白是Sey1p。我们首先解析了白色念珠菌Sey1p的胞浆段蛋白晶体结构,它具有N端的GTPase,其后是几组α-螺旋束组成的茎状结构。这个螺旋束结构比ATL的螺旋束长很多,而且对于Sey1p发挥融合功能也至关重要。Sey1p在结合GMP-PNP或者GDP/AlF4-的状态下形成并排的双体,在结合GDP的状态下呈现单体。随后我们发现重组有Sey1p的蛋白脂质体可以由不可水解的GTP类似物GMP-PNP介导膜泡融合,虽然介导融合效率比GTP的低。另外,Sey1p的构象变化发生在GTP水解后的磷酸释放这一环节。在哺乳动物细胞中,Sey1p可以代替ATL的功能,回补敲低ATL后内质网长而不分叉的表型缺陷,但是表达Sey1p细胞的内质网会在三维交叉处呈现大的斑点状结构,这种斑点状结构与Sey1p的GTP酶活有密切关系。我们的结果揭示了Sey1p和ATL等融合因子的共性,同时也发现了Sey1p独特之处。
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