本课题所研制的竞争性胶体金试纸条以奶牛血清中的生殖激素孕酮为检测对象，通过测定血清中孕酮水平的变化来判断奶牛妊娠与否。为建立孕酮胶体金免疫层析快速检测技术，首先采用二环己基碳二亚胺法将孕酮的衍生物P4-11α-半琥珀酸酯与载体BSA、OVA相偶联分别制备出免疫原和检测原，通过紫外光谱扫描法证明偶联成功；并通过计算，孕酮与BSA、OVA的偶联比分别为18:1和10:1；再以获得的免疫原P4-BSA免疫Balb/c小鼠，进一步制备孕酮多克隆抗体，通过ELISA法确定免疫小鼠血清中的孕酮抗体效价高达1:25600。采用辛酸-硫酸铵法从小鼠血清获得了较高纯度的抗体，并通过自主设计方法（金标载体吸附法）进一步从纯化的多克隆抗体中有效地清除了大部分载体抗体，从而相对提高孕酮抗体的有效浓度(抗体终浓度为1.53mg/mL)，这为高质量金标抗体的制备奠定了基础。以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒平均粒径为17.4nm，标记抗体时的最佳pH为9.0，饱和1mL的胶体金溶液孕酮抗体用量为36μg；通过筛选，NC膜上检测线竞争抗原最适包被浓度为0.072mg/mL，金标垫上金标抗体复合物的稀释倍数为4×。试纸条的各组件分别为Whatman Prima90（NC膜）、Ahlstrom8964（金标垫）、GF-08（样品垫）和H-8（吸水垫）。组装成完整的试纸条后，对孕酮标准样品的检测极限为7.6ng/mL，与直肠法相比该方法的阳性符合率为85％（17/20），阴性符合率为93.3％。本课题所制备的试纸条具有较高的灵敏度，能够在5min内检测配种后22d～26d奶牛血清中孕酮的水平，从而实现提早判断奶牛妊娠状态。