本研究所采用的主要实验手段和方法：1.利用噻唑蓝(methyl-thiazole-tetrazolium，MTT)比色法检测由有丝分裂原刀豆蛋白A(concanavalinA，ConA)诱导的大鼠脾脏淋巴细胞的白介素-2(interleukin-2，IL-2)生成，并检测ConA诱导的大鼠肠系膜淋巴结细胞的增殖，此两项作为评价T淋巴细胞功能的指标。 2.用乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase，LDH)释放法测定脾脏自然杀伤(naturalkiller，NK)细胞的细胞毒性，以此作为评价NK细胞功能的指标。3.已知酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase，TH)是CAs合成过程中的限速酶，我们利用免疫组织化学法检测TH在中枢和外周淋巴器官中，及在淋巴细胞中的表达，以证明淋巴细胞也具有合成CAs的酶系。 4.应用Westernblot方法测定淋巴细胞表达TH蛋白的特征。 5.利用逆转录－聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)观察THmRNA在淋巴器官和淋巴细胞中的表达，以从基因水平进一步说明淋巴细胞可表达TH。 6.用高效液相色谱法(high-performanceliquidchromatographyHPLC)直接测定培养48h的淋巴细胞内和淋巴细胞上清夜中NE、E和DA这三种CAs的含量。 本研究的主要结果：1.我们所用的三个浓度NE(10-10、10-9和10-8mol/L)都能明显抑制由ConA诱导的淋巴细胞产生IL-2(p＜0.01)。 2.α-肾上腺素受体(α-adrenoreceptor,α-AR)拮抗剂酚妥拉明(10-9或10-8mol/L)和β-肾上腺素受体(β-adrenoreceptor,β-AR)拮抗剂心得安(10-9或10-8mol/L)都能阻断NE(10-9或10-8mol/L)对IL-2生成的抑制作用。说明NE抑制IL-2生成的作用既可被T细胞上α-AR介导，又可被β-AR介导。3.所用三个浓度的NE(10-10、10-9和10-8mol/L)也能显著减弱NK细胞杀伤靶细胞的作用(p＜0.01)。 4.NE(10-9mol/L)抑制NK细胞的作用不能被酚妥拉明(10-9或10-8mol/L)阻断，而只能被心得安(10-9或10-8mol/L)阻断。表明NE对NK细胞的抑制作用可能只由NK细胞上的β-AR介导。 5.在被检测的肠系膜淋巴结、脾脏和胸腺三个淋巴器官中，都发现有TH免疫反应阳性细胞，但肠系膜淋巴结中TH免疫阳性细胞的分布密度最高，脾脏其次，胸腺最低。证实免疫系统可合成CAs，并揭示不同淋巴器官合成CAs的能力有差异。 6.由ConA激活的淋巴细胞中，TH阳性细胞比未激活的静止淋巴细胞中的TH阳性细胞数量多、面积大，但反映细胞内TH阳性颗粒密度的平均灰度没有随着细胞的增大而降低。说明T淋巴细胞在转化过程中TH表达增加。 7.在静止和ConA激活的淋巴细胞中都出现TH免疫反应阳性条带，其分子量为59.4±0.3kDa，与己知的TH由四个59kDa亚单位组成的事实一致。但在ConA激活的淋巴细胞中，TH免疫反应阳性蛋白的相对含量是静止淋巴细胞中的2.2倍(p＜0.05)。进一步证实淋巴细胞可表达TH，且淋巴细胞激活后TH表达增加。 8.在静止和ConA激活的淋巴结细胞中都有THmRNA的表达，但激活的淋巴细胞中THmRNA的相对密度是静止淋巴细胞的2.4倍，因而从基因水平进一步说明淋巴细胞可表达TH，并且在淋巴细胞增殖过程中TH表达增加。 9.在静止和ConA激活的淋巴结细胞中都可检测到NE、DA和E这三种CAs，但在激活的淋巴细胞中NE、DA和E的含量都显著高于未激活的淋巴细胞(p＜0.05)。揭示淋巴细胞能合成三种CAs，而且淋巴细胞激活后，三种CAs的合成都增加。 10.我们应用α-甲基酪氨酸(α-methyl-p-tyrosine，α-MT)以抑制淋巴细胞的TH从而阻断其CAs合成，观察它对T淋巴细胞增殖的影响。结果发现，所用四个浓度的α-MT(10-13、10-12、10-11和10-10mol/L)都可显著促进T淋巴细胞的增殖(p＜0.01)。说明淋巴细胞合成的内源性CAs可调节淋巴细胞自身功能，可能具有下调作用。 11.我们用优降宁来抑制CAs分解酶(单胺氧化酶)以增加淋巴细胞CAs，然后检测T细胞增殖的变化。结果显示，所用四个浓度的优降宁(10-13、10-12、10-11和10-10mol/L)都可明显抑制T淋巴细胞的增殖(p＜0.05或p＜0.01)。进一步表明内源性CAs可下调淋巴细胞自身功能。 12.在未用ConA刺激的静止淋巴细胞和用ConA刺激的激活淋巴细胞培养上清液中都可检测到NE、E和DA，其中DA含量最高，NE其次，E含量最低；而且激活的淋巴细胞培养上清液中这三种CAs含量都明显高于静止淋巴细胞培养上清液中的CAs含量(p＜0.01)。揭示淋巴细胞合成的CAs可分泌到细胞外，而且随着淋巴细胞的激活，分泌的CAs增加。 13.酚妥拉明(10-14、10-13、10-12或10-11mol/L)可部分阻断优降宁(10-13或10-12mol/L)抑制T细胞增殖的作用；而心得安(10-14、10-13、10-12或10-11mol/L)可完全阻断优降宁(10-13或10-12mol/L)抑制T细胞增殖的作用。表明内源性CAs下调T细胞功能可由α-和β-AR共同介导，可能β-AR的作用更强一些。 本研究的结论：1.外源性NE对T和NK这两种淋巴细胞都有抑制作用，提示体内交感神经兴奋可能具有较广泛的免疫抑制效应。 2.NE对T细胞的抑制由α-和β-AR共同介导，而NE对NK细胞的抑制主要由β-AR介导，因而不但从功能角度证实淋巴细胞存在β-AR，而且也阐明了目前尚有争议的问题，即淋巴细胞也存在α-AR。 3.已知胸腺是T淋巴细胞成熟的场所，它含有大量未成熟的T细胞，因此本研究发现胸腺含有最低密度TH免疫反应阳性细胞的结果提示，CAs可能由成熟的淋巴细胞合成。 4.我们在细胞、蛋白和基因水平的研究都提示淋巴细胞能合成CAs，且淋巴细胞的激活可促进CAs的合成。 5.淋巴细胞不同于外周神经和内分泌细胞，它能合成NE、E和DA所有三种机体内的CAs，并且在淋巴细胞被激活之后，其合成这三种CAs都明显增加。 6.由淋巴细胞合成的内源性CAs的作用及其作用机制可能与外源性CAs相似，即内源性CAs也可下调淋巴细胞自身功能，这种作用通过旁分泌和/或自分泌途径实现，并由淋巴细胞上的α-和β-AR共同介导。