菜粉蝶hsp90基因全长克隆及相关基因在蝴蝶系统发育研究中的有效性探讨

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菜粉蝶Pieris rapae属于鳞翅目Lepidoptera粉蝶科Pieridae粉蝶属Pieris,它在世界各地均有分布,在国内也是广泛分布。菜粉蝶的幼虫被称为菜青虫,寄主植物众多,是危害白菜、芥菜、甘蓝、萝卜等十字花科农作物的主要重要普发性害虫,严重影响了蔬菜的产量和品质。HSP90对于昆虫的生命活动具有重要的作用,是昆虫体内最重要的分子伴侣之一,参与昆虫生长发育、滞育、信号转导等重要的生物过程。此外,HSP90与昆虫的抗药性之间有一定的联系,因此对菜粉蝶hsp90基因进行相关方面的研究有助于对其进行更好的预防。本研究采用RT-PCR及SMARTer RACE方法对菜粉蝶的hsp90基因的cDNA全长进行了克隆,并且采用多种生物信息学方法对其进行了特性分析,此外,对昆虫基于HSP90氨基酸序列进行了系统发育分析。另外,本研究还探究了hsp90及Pgi部分基因序列构建的系统发育关系的可信度,我们扩增了 36种蝴蝶的hsp90部分基因序列及21种蝴蝶的Pgi部分基因序列,用于单独系统发生树的构建,以及联合COI、16S、wg、EF-1α基因进行系统发生树的构建,并且用2种构树方法进行相互验证。所得结论如下:(1)菜粉蝶的hsp90基因cDNA序列,全长为2461bp,其中开放阅读框(ORF)为2157 bp,共编码718个氨基酸,起始密码子为ATG,终止密码子为TAA。菜粉蝶HSP90与其他昆虫的同源性高达75%-95%,它属于ATP酶超家族,是亲水性蛋白,蛋白结构不稳定,分子量为81.9KD。同源性分析显示,菜粉蝶hsp90与东方菜粉蝶hsp90基因系统发育关系最近,并且聚类结果能够将昆虫归类到各自的传统分类地位中。(2)Pgi基因部分序列构建的系统发生树的拓扑结构与COI+16S+wg+EF-1α基因串联序列构建的系统发生树的拓扑结构不一致,可能不适用于做科及以下分类阶元系统发育研究的分子标记。hsp90单个基因部分序列与COI+16S+wg+EF-1α基因串联序列构建的系统发育树拓扑结构一致,可以用于科及以下分类阶元系统发育研究的分子标记。
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