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目的：在体外筛选高效率干扰小鼠Sez6基因表达的siRNA片段，将高效siRNA包装到慢病毒载体中，构建Sez6siRNA慢病毒系统。检测SEZ6基因在15种不同组织来源的人肿瘤细胞中的表达情况，探讨SEZ6基因与肿瘤细胞之间的关系，为进一步研究SEZ6基因的生物学功能提供理论依据。研究干扰小鼠小脑中Sez6表达后，小脑浦肯野细胞树突的生长发育与胞体的排列变化，阐述Sez6基因表达在小鼠小脑浦肯野细胞生长发育过程中的作用。
方法：针对Sez6基因组第二外显子设计合成不同的siRNA片段，构建pSilencer-SezsiRNA干扰质粒；同时构建Sez6第二外显子融合蛋白pFUGW-SEZ6重组子，干扰质粒与重组子在体外进行共转染NIH3T3细胞，筛选出高效率干扰Sez6基因表达的siRNA片段。构建Sez6第二外显子融合蛋白pFUGW-SEZ6重组子慢病毒系统，转染HK293T细胞培养稳定表达融合蛋白pFUGW-SEZ6的HK293T-SEZ6细胞株。挑选最高效率的siRNA片段，构建cFUGW-Sez6siRNA质粒。体外培养15种不同组织来源的人肿瘤细胞，抽提总RNA，运用RT-PCR检测SEZ6基因的表达情况。建立小鼠小脑组织切片体外培养模型。应用构建成功的cFUGW-Sez6siRNA质粒，建立Sez6siRNA慢病毒系统，感染切片培养的P0小鼠小脑，干扰小脑组织切片神经细胞Sez6基因表达。
结果：流式细胞术检测，筛选出干扰抑制效率达81.3％的siRNA片段；RT-PCR、WesternBlot检测证实，cFUGW-Sez6siRNA质粒构建成功。SEZ6在肿瘤细胞K562、A2780、SHP-77、H1299、SGC996、A549、H2122、SPCA、MHCC-97H、SW480、MDA-MB-435中表达，其中，在A2780、H1299、A549、MHCC-97H、SW480及MDA-MB-435细胞系中高表达，与阳性对照组无差异。在高转移性肿瘤细胞MHCC-97H、SW480、MDA-MB-435、H1299和SHP-77中SEZ6高表达，与低转移性肿瘤细胞有显著性差异(P<0.05)。慢病毒系统cFUGW-Sez6siRNA转染体外培养小鼠小脑组织切片后，观察到组织切片中浦肯野细胞生长发育变化：树突发育延后，分支数量减少，长度缩短(P<0.05)；浦肯野细胞胞体排列不整齐。
结论：建立高效的Sez6siRNA慢病毒系统，这为进一步应用慢病毒转染组织和动物活体打下基础。SEZ6基因在部分肿瘤细胞中表达，并在高转移性肿瘤细胞中高表达，提示SEZ6基因可能并与肿瘤的转移有关。在小鼠小脑切片中，慢病毒转染干扰Sez6基因表达后，浦肯野细胞树突发育受到影响。Sez6基因表达蛋白质中具有CUB结构，CUB对钙依赖性蛋白质问的相互作用是非常重要的，Sez6基因的表达可能跟小鼠小脑浦肯野细胞迁移排列相关。