目的研究蜂胶黄酮PB3A（Pinobanksin-3-acetate, PB3A）对人结肠癌SW480和HCT116细胞差异表达基因CXCL1、C3orf63、HSPA6及FOS mRNA转录和蛋白质表达水平的变化，探讨上述差异表达基因与PB3A抑制人结肠癌细胞发生、发展中的作用及可能的分子机制。方法1.采用100μg/mL PB3A处理处于对数生长期的结肠癌SW480和HCT116细胞24小时；使用倒置显微镜观察药物处理组与对照组细胞的形态学变化和生长状况。2．应用实时荧光定量RT-PCR (real time fluorescence quantitative PCR，FQRT-PCR)技术，对标本中各个分子指标进行扩增，以β-actin做为内参对照，绘制出标准曲线；并检测药物作用的CXCL1、C3orf63、HSPA6及FOS基因mRNA转录水平的变化。3.采用蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测结肠癌细胞CXCL1、HSPA6及FOS蛋白的表达变化，以β-actin做为内参对照，比较其差异性。4.采用SPSS17.0统计分析软件，对药物处理组和对照组各目的基因的△Ct值和蛋白表达的相对强度进行独立样本的双侧t检验，实验数据以mean±SD表示，以0.05判定为统计学检验的显著性标准。结果1.实时荧光定量RT-PCR结果显示，PB3A能够降低结肠癌SW480和HCT116细胞中CXCL1和C3orf63基因mRNA转录水平，与未干预的对照组相比，表达有极显著性差异（△CT比较，P<0.01）；在两种细胞株中HSPA6和FOS基因的mRNA转录水平均为升高，差异有极显著性（△Ct比较，P<0.01），本实验数据与基因芯片结果比较，各基因mRNA表达的改变趋势符合芯片结果，进一步验证芯片结果的精准程度。2. Western Blot结果表明，结肠癌SW480细胞经药物（PB3A100μg/mL）干预24小时后，细胞中CXCL1蛋白与β-actin相对灰度比（蛋白表达相对强度）为0.24±0.03，与对照组（0.52±0.04）相比，差异有统计学意义（P<0.05）；而HSPA6蛋白质表达水平（2.62±0.25）相对于对照组（1.67±0.05）明显升高，FOS蛋白相对表达强度为1.43±0.16，与对照组（0.58±0.07）比较有显著性差异（p<0.05）；同样，干预后的HCT116细胞CXCL1蛋白对于相应的对照组（5.84±0.24），表达水平下降，蛋白表达强度为4.76±0.35，有显著性差异（P<0.05），HSPA6蛋白的表达量（0.71±0.20）明显高于对照组（0.47±0.05）（P<0.05）；FOS蛋白与β-actin相对灰度比为2.92±0.34，与对照组（8.64±0.36）比较，表达有显著性差异。上述基因蛋白质表达水平的变化趋势与RT-PCR和基因芯片技术得到的结果一致。3.基因相对表达量相关性分析表明，SW480细胞株下调表达的CXCL1与C3orf63基因成正相关性（r=0.833，p<0.05），跟其它2条高表达基因之间没有相关性（p>0.05）；C3orf63与上调表达的FOS基因呈负相关系（r=-0.714，p<0.05）；其中上调表达的HSPA6和FOS基因之间呈高度正相关性（r=0.940，p<0.01）。而HCT116细胞株中CXCL1与HSPA6基因呈高度正相关性（r=0.881，p<0.01），下调表达的C3orf63基因与CXCL1和高表达的HSPA6基因均呈负相关系（-0.810<r<-0.762，p<0.05）。4.药物干预后SW480和HCT116细胞株CXCL1、C3orf63、HSPA6和FOS基因mRNA转录和蛋白质表达水平上有一定的差异，与前期研究结果结合，可说明PB3A对SW480细胞的增殖抑制作用比HCT116细胞强。根据Western Blot条带灰度值和RT-PCR△Ct结果表明，PB3A对两种结肠癌细胞株基因表达水平之间存在显著性差异。结论用蜂胶黄酮PB3A干预人结肠癌SW480和HCT116细胞后，诱导CXCL1、C3orf63、FOS及HSPA6基因表达水平的改变，提示PB3A抗人结肠癌细胞的作用可能与其下调CXCL1和C3orf63、上调HSPA6和FOS基因的表达有关。