表观遗传是在不改变DNA的序列的情况下对DNA或染色体的修饰。DNA甲基化是主要的表观遗传修饰，具有重要的调控功能。DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases，DNMTs)能够催化甲基从S腺苷甲硫氨酸转移到DNA。哺乳动物中的DNMT家族有五个成员:DNMT1，DNMT2，DNMT3A，DNMT3B，DNMT3L，其中DNMT3L因缺少催化结构域而不具有任何催化活性，但会与DNMT3A和DNMT3B相互作用促进它们的活性。　　Wnt信号通路是胚胎发育过程中重要的组成，其中经典Wnt通路依赖β-catenin转运到细胞核中，通过与T细胞因子/淋巴增强结合因子(T-cell factor/lymphoidenhancer-binding factor， TCF/LEF)结合，激活或抑制下游基因的表达。CHIR99021与PD0325901能够起到抑制细胞分化的作用，其中CHIR99021是常用的GSK3β的抑制剂，通过抑制此酶活性，使β-cateenin在核内积累，达到Wnt后续的转录信号传递。　　本文首先利用实时定量PCR实验，确定了不同浓度CHIR99021对甲基转移酶家族基因的表达影响，发现对Dnmt31基因有明显下调作用，而对于Dnmt3a，Dnmt3b等其余家族基因没有明显作用。利用蛋白免疫印迹实验确定了针对小鼠F9细胞，最适的CHIR99021处理浓度为10μM，并以此为重点进行后续研究，确定CHIR99021下调基因的具体机制。　　通过构建pCMV-Myc-β-catenin、pCDNA3.1-β-catenin和pCDNA3.1-β-catenin S37A载体，利用核质蛋白分离提取实验以及蛋白免疫印迹实验发现，CHIR99021对F9细胞处理后，β-catenin蛋白的总表达量有明显提高，并且细胞质和细胞核内的β-catenin含量都比对照组高，说明，CHIR99021可以通过抑制GSK3β来增加细胞质中β-catenin的稳定性，并且入核量也随之增高。通过双荧光素酶报告实验证明CHIR99021会对Wnt/β-catenin经典通路造成影响，激活该通路。过表达β-catenin后，Dnmt31基因的表达出现下调，因此可得，在小鼠F9细胞中CHIR99021能够通过抑制GSK3β，使β-catenin在细胞核中积累，激活Wnt/β-catenin经典通路，最终导致Dnmt31基因的抑制。　　β-catenin进入细胞核后，通常会与TCF/LEF复合体共同作用，并激活基因的转录，而对于本文研究基因Dnmt31的抑制效果很少见。此复合体中起到抑制效果的只有TCF3蛋白，其余成员起转录激活效果，而近期研究对TCF3的抑制机制并不明确，而且对其在经典Wnt通路的作用没有准确和唯一的答案，因此，我对TCF3在此机制中的作用进行了研究。本实验利用RNA干扰，免疫荧光染色，实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验，确定下调Tcf3(Tcf7l1)基因的表达会对Dnmt31基因有上调的影响，并且Tcf3和β-catenin基因在经过CHIR99021处理24h后，都具有上调效果。　　综上，本研究证明了CHIR99021能够通过抑制GSK3β，使β-catenin在细胞核中积累，激活Wnt/β-catenin经典通路，β-catenin与核内的TCF3结合，共同抑制Dnmt31基因的表达，为CHIR99021促进胚胎干细胞的自我更新能力提供理论依据。