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狂犬病是以恐水、畏光和狂躁等症状为特征的一种古老的人畜共患病。几乎所有温血动物都能感染狂犬病病毒(Rabies virus, RABV)并造成中枢神经系统损伤,形成致死性的脑脊髓炎。在发达国家,通过对犬的严格管理和预防免疫,已基本消除了犬狂犬病,从而有效控制住了人类狂犬病。在中国,犬是狂犬病病毒侵入人群的主要传染源和传播媒介,由犬传播导致人感染的病例约占狂犬病总数的85%-90%。因此,控制犬狂犬病并使人类免受狂犬病病毒的侵害,主要手段仍是犬的常规免疫以及人类的暴露前、暴露后免疫。本研究对兽用狂犬病病毒新型活疫苗进行了新的探索,主要研究内容如下：1.表达狂犬病病毒ERA株和CTN株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-(TK-/gE-/2G+)的构建、鉴定及免疫研究伪狂犬病病毒具有清楚的遗传背景、稳定的遗传特点、广泛的宿主范围、较高的增殖滴度、较大的外源基因插入容量(可容纳至少40kb)及不感染人等优点。因此本研究以伪狂犬病病毒Ea株的TK-/gE-/LacZ+变异株为载体构建重组病毒PRV-(TK-/gE-/2G+),并经PCR、southern blot和western blot鉴定正确。重组病毒免疫Balb/c小鼠,首免后3周就能检测到针对糖蛋白的ELISA抗体,二免后2周ELISA抗体有所升高但差异不显著,MTS的结果显示重组病毒激发机体产生了较高的细胞免疫,但未检测到狂犬病病毒中和抗体。重组病毒免疫犬,犬很敏感,均在两周内死亡,表明该致弱的伪狂犬病病毒载体对犬的安全性有待商榷。2.表达狂犬病病毒SRV9株核蛋白和糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-(Bartha-SN-SG)的构建、鉴定及免疫研究基于前期的伪狂犬病病毒对犬的安全性的考虑,改用天然致弱,后期缺失毒力因子gG的伪狂犬病病毒Bartha-gG-/EGFP+株为载体构建重组病毒PRV-(Bartha-SN-SG),并经荧光显微镜观察、PCR和western blot鉴定构建正确。重组病毒免疫Balb/c小鼠,首免后3周能检测到针对糖蛋白的ELISA抗体,二免后2周ELISA抗体升高但差异不显著,MTS的结果显示重组病毒激发了较高的细胞免疫,但中和抗体均为阴性。重组病毒以105TCID50免疫犬,免疫原性略差,中和抗体均为阴性,但该致弱重组病毒未对犬表现出致病性。3.表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒BV-VSV/G-G的构建、鉴定及免疫研究研究发现杆状病毒不能感染哺乳动物细胞,但是可以进入多种哺乳动物细胞中,通过合适的哺乳动物启动子表达外源基因,自身的基因组并不复制和表达,但是哺乳动物血清中的补体系统能抑制杆状病毒。已有研究发现膜上展示有水泡性口炎病毒融合糖蛋白(VSV-G)的杆状病毒粒子对补体系统有极强的耐受性,并能利用VSV-G的融合作用介导细胞间的融合。因此本研究构建了表面展示有VSV-G的表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒并对所构建的重组病毒进行免疫效力研究。重组病毒免疫ICR小鼠,首免后3周和二免后2周ELISA抗体及MTS刺激指数均超过伪狂犬重组病毒,二免后两周可检测到狂犬病病毒中和抗体(VNA>0.5 IU/mL),最高可达10.26 IU/mL,并呈剂量依赖性。重组杆状病毒免疫犬,均能产生中和抗体(VNA>0.5 IU/mL),但中和抗体水平个体差异比较大。获得的三株重组病毒做比较,表明重组杆状病毒作为RABV候选疫苗株更具有良好的应用前景。