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副猪嗜血杆菌病（haemophilus parasuis disease）是严重危害养猪业健康发展的重要细菌病，该病病原为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, Hps)。Hps是寄生于常规猪群上呼吸道的一种条件性致病菌，临床症状主要表现为关节肿大，跛行，高烧，呼吸高度困难等，剖检后病理变化主要表现为多发性浆膜炎、关节炎、心肌炎、脑膜炎等。本实验室先后从陕西省关中地区及周边二十七个猪场采集212份疑似病料，根据流行病学调查、临床症状、病理变化和细菌分离鉴定等方面研究，最终分离鉴定出4株副猪嗜血杆菌并分别命名为BJ1204、HX1212、BJ1212、YL1301。在此基础上，摸索出适合副猪嗜血杆菌培养和保存的条件，并对分离菌株进行了致病性试验、毒力测定和平板凝集试验。结果发现BJ1212菌株致病性较强，与本实验室保存的六株Hps均具有较好的交叉反应原性，可有望作为研制疫苗用种子菌。主要研究结果如下：1、2012年3月至2013年4月，先后从陕西省二十七个猪场采集到212份病料，经分离培养，革兰氏染色、镜检，发现菌落特征、细菌形态疑似副猪嗜血杆菌的特征，再经16S rRNA序列设计的引物进行PCR扩增，最终确定4株Hps，分离率为1.88%，结果表明Hps已经在陕西发生，从分离情况看，陕西宝鸡地区Hps感染情况比较严重。2、副猪嗜血杆菌不易培养的特性，在一定程度上影响了该菌从临床样品的检测，试验结果表明，Hps在副猪嗜血杆菌在普通琼脂平板培养基、血琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基上不生长，在巧克力琼脂培养基上生长较慢，在添加4%除菌犊牛血清和滤过除菌的0.01%NAD的胰蛋白胨大豆琼脂(Tryptic Soy Agar, TSA)培养基上生长良好，菌株形态稳定，适合此菌株生长。终浓度为20%的甘油置于-80℃保存是长时间保存较为可靠的方法，可存活3个月。3、将分离的BJ1204、HX1212、BJ1212、YL1301、BJ1001、XA1001六株Hps菌株分别做致病性试验。其中BJ1001、XA1001为本实验室分离保存菌株。经分离菌株的致病性试验，毒力测定。结果BJ1204的毒力最强，BJ1212毒力次之，HX1212，YL1301的毒性较弱，而其它菌株的致病性很弱或无致病性，从致病性试验分析，分离的各菌株致病性差异较大，推测副猪嗜血杆菌菌株之间的毒力差异很大。将分离的六株Hps菌株制作抗原和阳性血清，做平板凝集试验，初步筛选出交叉反应原性较好的菌株BJ1212。该菌有望做为疫苗用种子菌进行后续研究，如在小鼠模型上鉴定BJ1212血清在Hps菌株间的交叉保护试验、NTG诱变剂对该菌株培养致弱，以及在猪体内的攻毒保护实验。