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第一部分巨噬细胞极化与肝泡型包虫病相关性研究目的:初步探讨巨噬细胞极化与肝泡型包虫病的相关性。方法:收集泡型包虫病患者的肝脏标本(边缘带肝组织及正常肝组织)和血清标本,同时收集健康人血清标本。取肝脏组织行免疫组化染色分析M1/M2浸润情况;取血清样本使用ELISA法检测M1/M2相关细胞因子的表达情况。结果:1.临床资料提示HAE患者和健康对照组的性别、年龄、职业等差别均无统计学意义(P>0.05),而两组间的包虫抗体、PT、ALT、AST、ALP和ALB存在显著差异(P<0.05)。2.HE染色结果提示边缘带肝组织中存在大量炎性细胞浸润。肝组织免疫组化的结果显示:(1)正常肝脏组织(对照组)与边缘带肝组织(实验组)巨噬细胞的密度(细胞数/平方毫米)分别为(10.91±0.42,N=20),(38.76±1.02,N=20),组间具有显著差异(P<0.05)。(2)正常肝脏组织(对照组)与边缘带肝组织(实验组)中M1的密度分别为(3.97±0.23,N=20),(4.54±0.28,N=20),组间无明显差异(P>0.05);正常肝脏组织(对照组)与边缘带肝组织(实验组)M2的密度分别为(5.38±0.23,N=20),(26.33±1.09,N=20),组间具有显著差异(P<0.05);(3)HAE患者边缘带肝组织中M2/M1的比例比正常肝组织高,实验组为(6.25±0.45),对照组为(1.48±0.13),组间存在明显差异(P<0.05);2.血清ELISA结果提示:与健康人相比,患者血清中IL-6、TNF-α、TGF-β1、IL-10均有不同程度增加。IL-6(pg/m L)实验组为(16.56±10.79),对照组为(0.54±0.39);TNF-α(pg/m L)实验组为(17.92±8.89),对照组为(3.04±1.123);TGF-β1(ng/m L)实验组为(4.84±0.73),对照组为(3.91±0.41);IL-10(pg/m L)实验组为(9.74±3.36),对照组为(8.68±4.60)。其中IL-6、TNF-α和TGF-β1,组间具有显著差异(P<0.05)。结论:肝泡型包虫病患者的边缘带肝组织中存在大量的炎性细胞浸润,其中巨噬细胞的数量明显增加,而M2型巨噬细胞的比例较高。ELISA结果表明:M1/M2相关的细胞因子如IL-6、TNF-α和TGF-β1均有不同程度的增加,提示这些炎症因子可能参与了该疾病的进展。第二部分巨噬细胞表型转换在泡球蚴感染的不同阶段的动态变化目的:于不同时间阶段观察感染多房棘球蚴的小鼠体内M1/M2型巨噬细胞的变化,探讨巨噬细胞极化在该疾病发生发展中的作用。方法:通过体外建立小鼠肝泡型包虫病模型,分别于感染1、2、3和6个月处死小鼠,留取腹腔巨噬细胞和血液标本分别应用流式细胞技术和ELISA检测M1/M2巨噬细胞及其相关因子的表达情况。结果:1.流式结果提示:(1)与正常小鼠(0.25%±0.13%)相比,感染泡球蚴1、2、3和6个月的小鼠腹腔巨噬细胞中CD16/32+的巨噬细胞(M1)百分比分别为(5.00%±0.50%)、(7.00%±0.45%)、(22.55%±3.61%)和(33.38%±4.83%);(2)与正常小鼠(0.30%±0.14%)相比,感染泡球蚴1、2、3和6个月的小鼠腹腔巨噬细胞中CD206+的巨噬细胞(M2)百分比分别为(3.93%±0.98%)、(4.88%±0.45%)、(5.73%±0.51%)和(3.4%±0.62%)。(3)与正常小鼠相比,在感染泡球蚴后1、2、3和6个月CD16/32+巨噬细胞(M1)和CD206+巨噬细胞(M2)的百分比均有不同程度增加。组间具有显著差异(P<0.05)。CD16/32+巨噬细胞(M1)的百分比在感染后6个月最高,CD206+巨噬细胞(M2)的百分比在感染3个月最高。2.ELISA结果提示:(1)与正常对照组相比,感染1、2、3和6个月中IL-6、TNF-α、TGF-β1的含量均有不同程度增加,组间具有显著差异(P<0.05);而IL-10差异不明显,P>0.05,结果没有统计学意义。IL-6分别为正常对照组(0.351±0.052),感染1个月(28.642±4.705),感染2个月(82.484±18.684),感染3个月(172.910±27.336),感染6个月(112.725±165.099);TNF-α分别为正常对照组(0.338±0.210),感染1个月(0.861±0.586),感染2个月(1.495±0.253),感染3个月(8.908±1.080),感染6个月(16.607±4.650);TGF-β1分别为正常对照组(43.817±16.702),感染1个月(78.988±5.407),感染2个月(87.872±8.707),感染3个月(94.362±14.965),感染6个月(120.875±20.624);IL-10分别为正常对照组(0.024±0.006),感染1个月(0.027±0.009),感染2个月(0.029±0.006),感染3个月(0.027±0.009),感染6个月(0.028±0.012)。(2)IL-6在感染的前3个月中呈增加趋势,而后稍有下降;TNF-α随着感染时间推移呈增加趋势,在感染6个月时最高;TGF-β1随着感染时间呈增加趋势,在感染6个月时最高;IL-10也稍有增加,但趋势不明显。结论:我们探讨了多房棘球蚴感染后的不同时间阶段小鼠体内巨噬细胞表型的动态变化。我们的结果提示,巨噬细胞极化参与了多房棘球蚴感染的整个过程,M1/M2型巨噬细胞也在感染的过程中不断发生变化,当二者失衡,就会引起机体杀伤或者保护病原体。