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目的:建立新生大鼠脊髓腹角神经元急性分离方法及单细胞膜片钳记录技术,以深入研究脊髓腹角神经元上各受体的分布、分型和作用机制,为揭开脊髓的运动调制奠定基础,为运动神经元疾病的治疗提供思路。方法:选用鼠龄7-12 d的新生SD大鼠,麻醉后手术分离出含腰骶膨大的脊髓,修剪神经根后,制备400-500μm厚的横切片,置于人工脑脊液中孵育1小时;后在消化酶溶液中恒温消化20-35 mins,取出后沿中央管切除双侧背角,将剩余腹角的部分移至含标准细胞外液的培养皿中,用自制的玻璃吹管机械吹打,直至分离出单细胞,静置贴壁后,进行膜片钳电生理记录。通过快速给药系统给予工具药,记录细胞产生的电流变化,并可以通过成像系统采集单个神经细胞图像。结果:(1)分离的神经元胞体较大,呈纺锤形、三角锥形或多角形,边缘光整;神经元的突起从极端发出,形态较为完整,具有分支。(2)分离的脊髓腹角神经元基本电生理参数为:静息电位-65.34±13.63 m V,阈电位-46.11±8.96 m V,锋电位幅值54.51±15.17 m V,超射8.39±7.70 m V,放电频率19.93±9.22 Hz。(n=14)(3)谷氨酸诱发电流具有浓度依赖性,EC50=0.24 m M;平均翻转电位为17.63±10.04 m V。(4)尼古丁诱发电流具有浓度依赖性,EC50=0.08 m M;平均翻转电位为29.06±14.88 m V。(5)记录到的谷氨酸诱发电流达峰时间较短,受体激活较快,失敏较慢;而尼古丁受体激活较慢,失敏较快。平均上升斜率、达峰时间、平均下降斜率、失敏时间,均有显著性差异(p<0.05)。(6)6个神经元给予α7-n ACh R选择性阻断剂MLA时,尼古丁诱发电流并没有产生显著性变化。6个神经元给予α4β2-n ACh R选择性阻断剂DHβE时,其中有2个细胞尼古丁电流幅度减弱45%;而其它4个神经元,尼古丁电流没有被压抑,并且同时给予MLA时,均未被压抑或阻断。结论:按照所建立的脊髓腹角神经元急性分离方法得到的神经细胞形态良好,该急性分离方法切实可行。急性分离的脊髓腹角神经元可记录到稳定而连续的自发动作电位,神经元可记录到谷氨酸和尼古丁诱发的全细胞电流以及浓度依赖性反应,并可测得其翻转电位。部分神经元的尼古丁诱发电流可被DHβE压抑;大部分神经元的尼古丁诱发电流对DHβE和MLA均不敏感。我们所急性分离的脊髓腹角神经元上诱发的尼古丁电流,部分由α4β2-n ACh R介导;而另一部分,可能由非α4β2-非α7-n ACh R介导。