同种异体骨—前交叉韧带—骨解剖重建前交叉韧带的动物实验研究

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目的应用同种异体骨-前交叉韧带-骨(Bone-Anterior Cruciate Ligament-Bone, B-ACL-B)解剖重建兔前交叉韧带,并与自体骨-髌腱-骨(Bone-Patellar Tendon-Bone, B-PT-B)重建作对照,比较两者在移植术后的大体形态、生物力学及组织细胞学差异,寻求解剖重建ACL的有效材料和方法。方法将28只日本大白兔随机分为3组,即同种异体B-ACL-B重建移植组(A组)12只,自体B-PT-B重建移植组(B组)12只,空白对照组4只。切取B-ACL-B及B-PT-B移植物,并对异体B-ACL-B进行程序降温液氮冷冻保存14天。分别作同种异体B-ACL-B和自体B-PT-B重建术,于术后3月、6月、12月处死兔子取材,每次每组各4只,通过万能力学测试仪比较两组移植物的最大载荷、最大位移,观察断裂部位,并行HE染色在光镜下观察移植物的胶原和成纤维细胞的分布排列情况。结果一、大体形态观察:1、术后3月,异体B-ACL-B重建组及自体B-PT-B重建组ACL大体形态相似,连续性完整,表面有滑膜组织覆盖,可见骨-骨愈合;术后6月,两组移植物均较3月增粗,骨-骨愈合牢固;术后12月,两组关节腔内纤维增生明显,移植物增粗。二、生物力学测试:1、最大拉伸载荷测试:移植术后3月,异体B-ACL-B组最大拉伸载荷小于自体B-PT-B组,差异有显著性(p<0.05),6月及12月时两组比较无显著性差异(p>0.05),从3月到12月,各组最大拉伸载荷呈上升趋势,逐渐向正常ACL接近。2、最大拉伸长度测试:异体B-ACL-B组与自体B-PT-B组相比差异无显著性(p>0.05),从术后3月到12月,各组最大拉伸长度呈上升趋势,逐渐向正常ACL接近。3、断裂部位分析:两组在同一时间段比较止点断裂率无显著性差异(p>0.05),但各组术后3月分别与6月和12月比较时有显著性差异(p<0.05)。三、组织细胞学观察:1、术后3月,异体B-ACL-B组可见新生胶原和成纤维细胞样细胞增多,胶原变性,有较多的皱褶,结构松散,纤维排列紊乱;自体B-PT-B组可见肌腱浅层细胞较多,胶原变性,大量的成纤维细胞样细胞,细胞分布和纤维排列紊乱。2、术后6月,异体B-ACL-B组和自体B-PT-B组胶原排列较整齐,成纤维细胞增殖活跃。3、术后12月,异体B-ACL-B组胶原纤维排列较6月更加整齐,其形态接近正常ACL;自体B-PT-B组可见胶原纤维束沿应力方向排列、较致密。结论程序降温液氮冷冻方法可以降低异体移植物的抗原性,ACL重建后未出现明显的免疫排斥反应,同时韧带的生物力学性能也能得到较好的保存;应用同种异体B-ACL-B重建ACL可以取得与自体B-PT-B移植相似的生物力学和组织学结果,并且B-ACL-B重建更接近于正常ACL的解剖结构,能更大程度地恢复ACL的功能,可以作为ACL韧带损伤或断裂后的合适替代物。
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