兔PRF、A-PRF的制备及部分生长因子浓度测定

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目的:通过对人、兔血液流变学部分指标对比分析,筛选制备兔富血小板纤维蛋白(Platelet-rich fibrin,PRF)和改良型富血小板纤维蛋白(Advanced platelet-rich fibrin,A-PRF)凝胶的方法,研究兔标准PRF和A-PRF的体外部分生长因子释放规律,为后续动物实验及临床研究提供数据参考。方法:采集12名健康志愿者(男女各6人)肘静脉全血、12只健康日本大耳兔(雌雄各6只)耳中动脉全血各5ml,进行血液流变学指标统计分析。选择17种离心方法制备兔PRF凝胶,16种离心方法制备兔A-PRF凝胶,通过光镜、扫描电镜观察,与人体标准方法制备的PRF、A-PRF对比分析,筛选与人PRF、A-PRF镜下微观结构最接近的兔PRF、A-PRF制备方法;用筛选的最佳制备方法制备兔PRF、A-PRF,进行体外静置,观察在20min,1h,4h,1d,3d,5d,7d,14d,21d,28d 10个时间点有促进软硬组织再生作用的生长因子IL-1,IL-4,PDGF,TGF-β1,TNF-α,VEGF的释放量。结果:(1)兔血液在高、中、低三种剪变率下全血粘度,全血高切、低切还原粘度,全血高切、低切相对指数,红细胞聚集指数均显著低于人血液(P<0.05),其余血液流变学指标无统计学意义(P>0.05)。(2)17种离心方法制备的兔PRF和16种离心方法制备的兔A-PRF,各组表现不一,凝块结构分层、活细胞数量范围、纤维蛋白排列各不相同。其中3250 rpm/min,10min制备的兔PRF与人体PRF镜下微观组织学结构最为接近;2000 rpm/min,24min制备的兔A-PRF与人体A-PRF镜下微观组织学结构最为接近。(3)兔PRF和A-PRF体外静置,实验周期内释放的生长因子中总含量最多的是PDGF,但两组间无显著差异。兔A-PRF组在7d、21d、28d释放的生长因子IL-1明显高于PRF组,但两组间整个实验周期内释放的IL-1总蛋白含量没有明显差异。兔A-PRF组在3d、21d释放的生长因子IL-4明显高于PRF组,且实验周期内释放IL-4总蛋白含量明显高于PRF组,差异有统计学意义。兔A-PRF组实验周期内释放的生长因子TGF-β1,TNF-α,VEGF总蛋白含量均高于PRF组,差异有统计学意义,但两组间在各个时间段释放量均没有明显差异。结论:兔血全血粘度、全血还原粘度、全血相对指数和红细胞聚集指数显著低于人血,其余血液流变学指标无明显差异。3250 rpm/min,10min制备的兔PRF与人体PRF镜下微观结构最为接近,2000 rpm/min,24min制备的兔A-PRF与人体A-PRF镜下微观结构最为接近。兔PRF和A-PRF组在28天内释放的生长因子中总含量最多的是PDGF,但两组间无显著差异。兔A-PRF在7d、21d、28d释放细胞因子IL-1明显高于PRF组。兔APRF28天内释放的生长因子IL-4,TGF-β1,TNF-α,VEGF总含量较PRF多。
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