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前列腺癌（PCa）是一个全球性的健康问题，已成为世界男性第二位最常见的非皮肤癌，占男性癌症的10%。近年来，前列腺癌患者的5年生存率已经位居所有癌症的第三位。有效治疗前列腺癌的方法仍然是迫切需要解决的问题。最近两项随机临床试验的结果表明，以多西紫杉醇为基础化疗改善了激素难治性前列腺癌（HRPC）患者的生存。以紫杉类药物为基础的治疗和放射治疗是一种治疗前列腺癌很有前途的方法。此外，加入碳铂多西他赛被认为是对难治性前列腺癌进展中或治疗后不久具有很好耐受性，治疗效果良好。这些研究提供了进一步的证据，铂盐在治疗本病有一定的作用。然而，顺铂（DDP）为基础的方案往往会导致严重的毒副作用，如骨髓抑制、乏力、胃肠道疾病及对心脏、肾和神经系统的影响。这些不良反应通常会导致停药和降低疗效。既能减少顺铂的毒副作用又能提高其治疗效果，是一个有希望的策略。如低剂量的化疗药物顺铂与其他方法联合有可能增加癌细胞对化疗药的敏感性。众所周知，细胞生长和死亡通常是由癌基因和抑癌基因之间的平衡决定的。P53起着调节和平衡细胞与组织的角色。失活的p53引起的负调节因子，如鼠双微体2（mdm2），在很多人类癌症的发展中起作用。Mdm2是一种E3泛素连接酶，直接结合泛素化的p53。过表达mdm2的肿瘤抵抗p53基因治疗。据报道，前列腺癌mdm2蛋白敲除在体外和体内能够增强放射治疗敏感性。因此，干扰p53-mdm2反馈回路的抗肿瘤的策略，可恢复p53肿瘤抑制途径。因此，直接下调mdm2表达其特定的siRNA对具外源性p53基因表达的肿瘤细胞可能是前列腺癌一种有效的治疗方法。在本研究室以往的实验中，我们发现敲除mdm2表达其特定的siRNA和过度表达的（WT）野生型p53基因在体外抑制前列腺癌细胞的生长，且在体内二者起到了协同的作用。一个有效的基因传递系统的选择，可以在不损伤正常组织的情况下选择性地针对肿瘤、并传递到肿瘤中。减毒沙门菌及兼性厌氧菌，比起其它目前使用的抗癌载体具有特异性。鼠伤寒沙门菌可优先扩增和居住在实体肿瘤（比在正常组织中的肿瘤扩大1000倍），并对正常组织的毒性最小。最近，这些细菌已被设计以表达更多的基因，包括多药耐药基因1（MDR1）和STAT3的siRNA和IL-2、IL-12的siRNA。例如，我们的研究已经表明，减毒沙门菌提供了一个显著抑制鼠伤寒沙门菌携带STAT3特异性siRNA影响前列腺癌细胞的生长。在以前的研究中，我们在体外和体内实验共转染mdm2siRNA的直接下调mdm2蛋白的表达与野生型p53基因在前列腺癌细胞；对于在体内研究中，我们已经使用了鼠伤寒沙门菌进行各种质粒转染前列腺癌细胞在裸鼠异种移植物模型。本实验室以往研究已经证明，下调mdm2过表达其特定的siRNA并且联合表达野生型p53基因，对体外和体内前列腺癌细胞生长具有协同抑制作用。在本研究中，我们使用减毒沙门菌进一步探讨鼠伤寒沙门菌携带的共表达质粒siRNA-mdm2和野生型p53基因联合低剂量顺铂治疗前列腺癌异种移植裸鼠模型中的作用，并研究其抗肿瘤作用。目的：观察低剂量顺铂联合共表达siRNA-mdm2和p53对裸鼠前列腺癌皮下移植瘤的治疗效果，探讨顺铂与共表达siRNA-mdm2和p53的协同作用及抗肿瘤机制，为前列腺癌的临床治疗提供新的实验依据。方法：1.铺板法检测沙门菌在肿瘤及脏器的分布情况；2.HE染色观察各组肿瘤组织及各脏器细胞形态；3.体内研究：复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型，分为6组，减毒沙门菌携带的质粒尾静脉注射裸鼠体内，顺铂腹腔注射，观察抑瘤效果。免疫组化检测mdm2，PCNA蛋白的表达；RT-PCR及Westernblot检测肿瘤组织相关基因和蛋白（p53,mdm2,bax,bcl2,caspase3,caspase9）的表达。4.TUNEL法检测各组肿瘤细胞凋亡。结果：1.尾静脉注射减毒沙门菌后72h和第10d涂板，72h时，在肿瘤组织以及心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等脏器有很多菌落分布。在第10天的时候，只有肿瘤组织有很多菌落分布，肝脏、脾脏等脏器几乎没有菌落生长，说明沙门菌具有肿瘤靶向性。2.与对照组相比较，Pmp53组、DDP组、DDP+si-scramble组、DDP+Pmp53组的肿瘤均出现了不同程度的坏死、凋亡，其程度以DDP+Pmp53组最为显著，并且病理检查各脏器未发现明显副作用。3.顺铂联合共表达质粒Pmp53显著抑制了肿瘤的生长，联合治疗组瘤重和体积较对照组显著降低；免疫组化检测肿瘤组织联合治疗组mdm2、PCNA表达明显减少；RT-PCR及Westernblot检测结果，顺铂联合Pmp53增强了p53、bax、caspase3、caspase9的表达，降低了mdm2、bcl2的表达。4.TUNEL检测显示联合治疗组较对照在凋亡细胞明显增多。结论：1.减毒沙门菌能够携带共表达质粒进入肿瘤细胞中，使目的基因顺利表达。2.顺铂联合减毒沙门菌携带共表达质粒p53与siRNA-mdm2抑制了裸鼠肿瘤中mdm2基因的表达，增加肿瘤中p53的表达。3.与单独治疗组相比，顺铂与Pmp53的联合治疗对移植瘤前列腺癌显示出更强的抑制作用，并且未发现明显副作用。4.联合治疗的抑瘤机制可能是由于二者的协同作用在体内外对前列腺癌显示了良好的治疗效果，其机制之一可能与p53激活了bax的表达，抑制了bcl2的表达，导致bcl2/bax比值降低，最终激活caspase3，促进了相关的肿瘤细胞发生凋亡。上述结果提示，顺铂针对p53/mdm2轴的研究可能是一个更好的治疗肿瘤的新策略。