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目的同种异体脱钙骨(Decalcified Bone Matrix,DBM)和骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Stem Cell,BMSC)制成细胞-支架复合物,分别对在兔膝关节腔内和体外培养组织工程软骨(Tissue Engineered Cartilage,TEC)并比较关节腔内培养环境的优点。方法同源雄性新西兰白兔(1～3月龄)全骨髓贴壁筛选法培养原代BMSC,传代至第三代时加入软骨细胞诱导液:含转化生长因子(Transforming Growth Factor,TGF)-β1 10ng/ml、胰岛素样生长因子(Insulin-like Growth Factor,IGF)-1 20ng/ml、维生素C 50ng/ml,诱导前后细胞做Ⅱ型胶原免疫组化相对比。诱导7d后,细胞复合DBM支架分别进行体外培养(A组),30只成年雄性新西兰白兔左膝关节腔内(B组)培养,膝关节腔内(C组)培养单纯脱钙骨支架做空白对照。每4、8、12周各组标本分别取材,制石蜡切片行苏木素伊红染色(Hematoxylin-Eosin Staining,HE)、甲苯胺蓝(Toluidine Blue,TB)染色、Ⅱ型胶原免疫组化等组织学观察。通过形态学分析软件计算免疫组化平均光密度(Optical Density,OD)值,采用SPSS l5.0统计学软件对实验数据进行统计学分析,实验数据用(x±s)表示,按完全随机设计进行方差分析、两两比较的q检验及重复测量方差分析,检验标准P<0.05判定差异有显著性。结果HE染色4周时A组标本见软骨细胞散在分布于支架表面,内部基本未观察到细胞。B组标本支架内软骨细胞数量明显较多,软骨陷窝形成,陷窝周围基质深染,可见由单个细胞分裂形成的同源细胞群。8周时B组标本以成熟软骨细胞为主,细胞数量多,出现柱状排列的同源细胞群,细胞周围分泌着色均一的玻璃样基质,且渗入支架结构内部,脱钙骨支架有部分被吸收。12周时各组支架结构明显被吸收,A组支架内填满软骨细胞,部分已纤维化,但结构排列紊乱。B组支架呈透明软骨样,软骨细胞充分渗透进入支架内,呈一定应力方向排列。A,B两组间Ⅱ型胶原免疫组织化学OD值统计学分析比较发现:第4,8,12周B组Ⅱ型胶原免疫组化的OD值均高于A组,差异具有统计学意义(P<0.01)。两组Ⅱ型胶原免疫组化的OD值随时间的变化趋势比较,结果显示差异具有统计学意义(P<0.01)。结论同种异体脱钙骨支架复合经细胞因子诱导的BMSC,在膝关节腔内进行培养,利用关节腔内低氧、多种生长因子的微环境以及关节活动时的应力刺激等优势,较体外培养可以培养出组织学特点更好的工程软骨。