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第一部分：乳鼠心肌细胞的培养以及腺病毒介导干扰RNA的转染目的：原代培养乳鼠心肌细胞,确定腺病毒介导的干扰RNA体外转染乳鼠心肌细胞的最佳MOI值。方法：(1)乳鼠心肌细胞的原代培养取刚出生72小时内的SD乳鼠,消毒,开胸,取左心室部分,冰浴的D-hanks液中洗涤,剪碎。胶原酶Ⅱ消化3-5次,离心,收集细胞,20%血清的培养液混悬,差速贴壁90分钟,收集培养液中的非贴壁细胞,种于6孔板,48小时更换培养基,用倒置显微镜观察细胞生长状态和自发搏动情况。(2)心肌细胞的鉴定：针对胞浆中α-actin和肌钙蛋白cTnT,分别采用免疫荧光法和免疫组织化学法对心肌细胞进行鉴定。(3)Ad-siRNA体外靶向性转染心肌细胞最佳滴度检测体外原代培养乳鼠的心肌细胞,将腺病毒介导的干扰RNA按不同的MOI值进行转染。通过倒置荧光显微镜、流式细胞仪确定此腺病毒体外转染心肌细胞的最佳MOI值,并确定其安全性和感染力。结果：(1)倒置显微镜下观察：原代培养细胞24小时后可贴壁,48小时后出现自发博动,72小时后细胞间形成细胞连接,成簇生长。(2)经免疫荧光法和免疫组织化学法鉴定培养的细胞为心肌细胞,且纯度可达95%以上。(3)倒置荧光微镜以及流式细胞术检测腺病毒的转染效率：转染后72h,MOI值为100时,腺病毒的红色荧光表达最强,感染效率高于90%。结论：本实验成功培养了乳鼠心肌细胞,并且确定了腺病毒介导的siRNA在体外安全有效的转染原代心肌细胞的佳MOI值。第二部分：APN/T-cadherin在缺氧/复氧导致乳鼠心肌细胞凋亡中的作用目的：建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型,同时使用腺病毒介导的干扰RNA技术体外沉默脂联素受体T-cadherin的表达,观察APN/T-cadherin对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响。方法：选用原代培养72小时的单层心肌细胞随机进行实验,随机分为5组：①空白对照组：心肌细胞正常培养;②缺氧/复氧组;③脂联素+缺氧/复氧组④脂联素+缺氧/复氧+Ad-T-cadherin-siRNA组;⑤缺氧/复氧+脂联素+Ad-siRNA(腺病毒阴性对照)组。倒置荧光显微镜下观察各组心肌细胞的形态以及自发搏动情况；在MOI值为100,转染72h后,用Real Time-PCR和Western blot方法检测各组细胞T-cadherin的表达的情况；流式细胞术,脱氧核糖核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞的凋亡。结果：(1)各组心肌细胞形态学比较：H/R组细胞生长状态差,细胞自发搏动率减弱。而H/R+APN组,多数细胞结构接近正常,细胞搏动较快。H/R+APN+Ad-T-cadherin-siRNA组,多数细胞状态差,自发搏动较H/R+APN组明显减慢。H/R+APN+Ad-HK组,细胞状态良好。(2) RT-PCR和Western blot印迹分析的结果显示：各组均可以检测到T-cadherin mRNA和蛋白的表达,其中与正常组比较,H/R组T-cadherin的表达明显降低,差异显著(P<0.05)。给予脂联素预处理后,T-cadherin的表达明显增高,与H/R组比较差异有统计学意义(P<0.05)。APN+H/R+Ad-T-cad-siRNA组T-cadherin mRNA和蛋白表达也明显降低,与APN+H/R组比较,差异显著(P<0.05)。(3)流式以及TUNEL结果均显示：与正常组比较,H/R组细胞的凋亡明显增多,差异显著(P<0.05)。给予脂联素预处理后,心肌细胞的凋亡比较与单纯的H/R组,凋亡明显降低(P<0.05)。与H/R+APN组相比,APN+H/R+Ad-T-cad-siRNA组心肌细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而与单纯H/R组相比,凋亡率差异不明显(P>0.05)。结论：(1).重组腺病毒Ad-T-cadherin-siRNA能够在体外高效、安全地感染原代心肌细胞,并成功降低T-cadherin在心肌细胞的表达。(2)脂联素可以减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞的凋亡。(3)低表达的T-cadherin受体阻断了脂联素对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用。