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甘薯(Ipomonea batatas Lam)属旋花科甘薯属,是我国主要的经济和粮食作物之一,中国是生产甘薯的大国。田间调查发现,甘薯深受多种病毒侵染,导致产量下降、品质变劣,造成巨大的经济损失。脱毒健康种苗的培育是提高甘薯产量、改良品质的主要手段,本研究对临安市等7个杭州市甘薯主栽区的甘薯病毒病发生状况进行了调查和检测,并对甘薯’1042’株系通过剥茎尖结合小滴液化法获得了脱去甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato featherymottled virus,SPFMV)的脱毒种苗,开展了脱毒种苗繁育体系研究。研究结果如下:1、杭州市甘薯主产区病毒病发生状况调研和采样。调研了余杭、桐庐、萧山、富阳、建德、淳安、临安等7个杭州市甘薯主产区,发现主产区甘薯普遍具有矮化、花叶、皱缩、叶脉突起等症状,采集具有病毒病典型症状的叶片20份,其中余杭2份、桐庐4份、萧山3份、富阳2份、建德4份、淳安3份、临安2份。初步确认杭州市主产区的甘薯受到病毒病感染。2、甘薯病毒病检测。以病毒症状严重的病样(桐庐TL-4)为材料,经电镜负染色观察到组织汁液中含有大量600～900 nm的弯曲线状病毒粒子,超薄切片中发现细胞质内存在着大量结晶体。RT-PCR结果表明,杭州市20份病样中检测到甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottled virus,SPFMV)、甘薯褪绿矮缩病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)、甘薯G病毒(Sweet potato virus G,SPVG)、甘薯C病毒(Sweet potato virus C,SPVC)、甘薯G病毒(Sweet potato virus G,SPVG)、甘薯Y病毒(Sweet potato virus Y,SPVY)和甘薯褪绿斑病毒(Sweet potato chlorotic flecks virus,SPCFV)等6种病毒。其中桐庐检测到6种、余杭检测到4种、建德检测到4种、淳安检测到3种,临安检测到2种、萧山检测到1种、富阳检测到1种。3、甘薯茎尖小滴液化法脱毒体系建立。通过预培养基蔗糖浓度、玻璃化溶液成分以及处理时间等因子对茎尖再生率影响的研究,建立了高效简便的茎尖小滴液化法,具体方法为:剥离带有SPFMV的甘薯’1042’无菌苗约1.0mm顶端茎尖,在预培养基A(0.3 mol/L蔗糖+MS,pH=5.8)和预培养基B(0.5 mol/L蔗糖+MS,pH=5.8)中分别培养1d后,依次用加载液(2mol/L甘油+0.4mol/L蔗糖,pH=5.8)处理 60 min、PVS2(MS+30%甘油 +15%乙二醇+15%DMSO+0.4mol/L蔗糖,pp5.8)处理60min、液氮处理301min,洗涤液(1.2 mol/L蔗糖+MS,pH=5.8)处理20min,最后把茎尖接种于恢复培养基A(不含NH4+的MS+0.5mg/LBA)黑暗培养3d,再转入恢复培养基B(MS +0.5mg/L BA)培养 1 周,转入再生培养基(BM+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+8 mg/L GA3;BM:0.01 g/L Ca(NO3)2,0.2 g/L G6H8O6,0.02 g/L C4H12N2,0.002 g/L C18H32N2O10Ca和0.1 g/LC6H14N4O2+MS),茎尖存活率81.88%,植株再生率72.06%。经RT-PCR和EL1SA检测,结果表明小滴液化法的脱毒率为100%。同时发现只经过茎尖培养的植株,经检测SPFMV脱毒率为33.33%。4、不含SPFMV的’1042’脱毒苗繁育。将不含SPFMV的’1042’脱毒植株切割成含有1-2个节间的茎段,茎段接种于生根壮苗培养基,培养3-4周后,植株长到6-8 cm,5-7片叶子,3-5个节问时,于室温下放置一周后洗净,移栽于带有防虫网的培养箱(珍珠岩:蛭石:泥炭=1:]:2)中,成活率为1100%。2个月后苗移栽海南岛基地繁殖。5、脱毒种苗的生长指标测定和品质分析。分别检测脱毒苗与对照苗地上部分和地下部分的形态学指标,结果表明脱毒苗的薯块形态、干重、叶长、叶宽、蔓长、蔓粗、分枝数等显著优于对照苗。淀粉、可溶性总糖、维生素C和β-胡萝卜素等指标的测定结果,表明脱毒甘薯维生素C和β-胡萝卜素含量明显高于对照,淀粉、可溶性总糖和蛋白质略高于对照,还原糖等无明显变化。