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目的:观察大鼠触液核和脑脊液中脑啡肽(Enkephalin,ENK)的分布及其在神经病理性疼痛条件下的表达变化,探讨触液核在神经病理性疼痛中的作用及其与脑脊液之间的关系。 方法:一、雄性SD大鼠(250±50g)6只,大鼠处死前48h侧脑室引入CB-HRP追踪定位触液核,处死前由枕骨大孔抽取脑脊液。 (1)应用免疫荧光化学双重标记技术与激光共聚焦显微镜技术相结合,检测ENK在正常大鼠触液核的分布。 (2)应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测ENK在脑脊液中分布。 二、雄性SD大鼠(250±50g)随机分为神经病理性疼痛组(CCI组)和假手术组(Sham组),(n=6)。各组大鼠处死前48h侧脑室引入CB-HRP追踪定位触液核,处死前由枕骨大孔抽取脑脊液。 (1)应用电子Von Frey触痛仪和热辐射刺激仪测定机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)作为行为学观察指标。 (2)应用免疫荧光化学双重标记技术与激光共聚焦显微镜技术相结合,定位、鉴别和计数脑啡肽(ENK)在正常大鼠触液核的分布及在神经病理性疼痛条件下的表达变化。 (3)应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测Sham组和CCI组大鼠脑脊液中ENK含量的变化。 结果:一、正常大鼠 (1)正常大鼠触液核内可见CB-HRP/ENK阳性双重标记细胞(黄色),计数为415±23。 (2)正常大鼠脑脊液中ENK含量为210.32±15.72pg/ml。 二、神经病理性疼痛大鼠 (1)行为学表现 神经病理性疼痛条件下,CCI组MWT和TWL自3天起降低,持续至14天,7天达最低值(28.6±7.7g、9.52±1.71s)与Sham组(50.3±6.6g、16.78±2.03s)相比较差异有统计学意义(P<0.01)。 (2)免疫荧光 各组免疫荧光图片均显示ENK(绿色)、CB-HRP(红色)和CB-HRP/ENK(黄色)免疫阳性细胞。CCI组3d、7d、10d和14d四个时程CB-HRP/ENK双标阳性细胞数为:469±29、584±35、522±28和477±26;与Sham组:420±34、415±23、410±34、406±29比较明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。 (3)EUSA CCI组3d、7d、10d和14d时ENK含量较Sham组显著增多(P<0.05);7d时ENK含量达峰值(278.37±14.80 pg/ml),与Sham组(219.01±18.92 pg/ml)比较差异有统计学意义(P<0.01)。 (4)相关性分析 神经病理性疼痛条件下,免疫荧光双重标记细胞计数与脑脊液脑啡肽浓度呈正相关,r=0.793,p<0.01 结论:(1)正常大鼠触液核表达ENK;正常大鼠脑脊液中含有ENK。 (2)确定神经病理性疼痛模型建立成功;大鼠脑实质的特定部位恒定存在触液核团;神经病理性疼痛条件下,触液核ENK表达增多,并与痛行为时相一致,提示触液核ENK能神经元可能参与了神经病理性疼痛形成与发展。 (3)大鼠脑脊液中含有ENK;神经病理性疼痛条件下,脑脊液中ENK含量增多,并与痛行为时相一致,提示脑(神经)-脑脊液(体液)途径可能参与了神经病理性疼痛的调节。