奶牛乳房炎是当今世界上引起奶牛业经济损失最严重的一种疾病,可造成产乳量的减少和质量低下。了解引起乳房炎主要致病菌的种类,建立快速检测乳房炎病原菌的方法,并选择敏感性药物对其进行治疗具有重要意义。本文共分四部分内容。 试验一 奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定 对山东省济南、泰安、临沂三地区患乳房炎的奶样进行病原菌分离鉴定。结果表明三地区个体奶牛场临床型乳房炎检出率最高的病原菌分别是真菌、真菌、链球菌或芽孢杆菌;济南市规模化奶牛场检出率最高的病原菌是链球菌,其次是葡萄球菌。总体情况是链球菌引起的临床型乳房炎占居首位,其次是肠杆菌、葡萄球菌、真菌、芽孢杆菌。临床型乳房炎链球菌、真菌的检出率明显高于隐性乳房炎,而葡萄球菌、肠杆菌、芽孢杆菌的检出率低于隐性乳房炎。病原菌的混和感染率临床型乳房炎低于隐性乳房炎。本研究表明由葡萄球菌、肠杆菌、链球菌引起的乳房炎仍占主要地位,芽孢杆菌、真菌在山东部分地区成为引起乳房炎的主要病原菌,特别是在济南、泰安地区个体奶牛场中真菌检出率位居首位,应引起足够的重视。 试验二 奶牛乳房炎病原真菌的分离鉴定及其快速检测方法的 建立 探索了鉴定白色假丝酵母菌的鉴定方法,并对酵母菌性乳房炎病原菌感染率进行了调查。结果表明真菌的感染率与混和感染率临床型乳房炎高于隐性型乳房炎;规模化奶牛场的混和感染率和真菌检出率低于个体奶牛场;不同地区均有真菌感染,并且感染率比较高。利用18S rRNA建立了检测真菌的巢式PCR;敏感性试验表明肉汤中可以检测到1CFU/mL的病原菌,奶样中可以检测到10CFU/mL的病原菌。 试验三 巢式PCR检测无乳链球菌16S rRNA方法的建立 利用16S rRNA建立了检测奶样中的链球菌属和无乳链球菌的巢式PCR。敏感性试验表明,直接扩增能检测到肉汤中10~1CFU/mL的无乳链球菌,奶样中为10~2～10~3CFU/mL;过夜培养后能检测到原奶样中的1CFU/mL的无乳链球菌。与传统方法相比,该方法具有特异强、敏感高、速度快等特点,适于临床上快速检测无乳链球菌性乳房炎,并可用作牛群