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目的:检测在正常的乳腺上皮细胞以及几种不同的乳腺癌细胞系中的翻译调控的肿瘤蛋白(Translationally-controlled tumor protein，TCTP)、小热休克蛋白(AlphaB-crystallin，CRYAB)、膜联蛋白Al(AnnexinAl)等的表达情况，筛选出和蒙药乳腺-Ⅰ号(RuXian-Ⅰ，M-Ⅰ)治疗乳腺增生症中发挥关键作用的分子靶标，为进一步研究蒙药乳腺-Ⅰ号的作用机制提供依据。 方法:1.培养正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-435S，分别提取RNA，采用实时定量PCR技术检测三个蛋白mRNA的表达情况，同时提取四种细胞的全蛋白质，采用免疫印迹方法检测三个蛋白质在不同细胞系中表达情况。2.不同细胞系提取RNA后，进行反转录，扩增目的片段并与真核表达载体连接，为后续构建高表达细胞系做准备。 结果:1.成功培养正常乳腺细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-435S，在细胞对数生长期，提取RNA，经检测纯度和浓度，可用于下步实时定量RNA实验。2.在PCR扩增过程中没有非特异性扩增，也没有引物二聚体的干扰，引物特异性较好，定量PCR扩增所获得的数据是可靠的。3.利用软件对TCTP、CRYAB和AnnexinAl基因进行相对定量分析得到柱状图。2-ΔΔCt法计算结果显示TCTP、CRYAB和AnnexinAl的表达情况:TCTP、CRYAB在乳腺癌细胞和乳腺细胞中都未检测到，而TCTP、CRYAB和AnnexinAl在乳腺癌细胞中表达显著增加（P＜0.01）。4.应用Western blot方法检测TCTP、CRYAB和AnnexinAl在乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和MDA-MB-435S中蛋白质表达量的差异;结果与之前Real-time PCR所得结果相一致， AnnexinAl在乳腺癌细胞株中的表达显著高于其在正常乳腺细胞中的表达。5.采用分子克隆方法成功构建AnnexinAl真核表达载体。 结论:1.本实验通过培养几种乳腺癌细胞，用Real-time PCR和Western blot检测手段检测TCTP、CRYAB和AnnexinAl在不同乳腺癌细胞系的表达，实验结果显示无论在转录水平还是翻译水平，在乳腺癌细胞系中AnnexinAl的表达都高于其在正常乳腺细胞系中的表达。本实验结果与前期蛋白组学分析发现的研究结果是统一的。2.实验结果提示我们，乳腺癌相关蛋白AnnexinAl在癌发生中起到关键作用，而乳腺-Ⅰ号可以抑制该蛋白的表达。3.乳腺-Ⅰ号对几种不同的乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和MDA-MB-231具有不同程度的抑制作用。