【摘 要】
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目的:课题组前期研究NSCLC患者组织芯片发现,在癌组织中,ANKRD49的表达高于邻近正常组织,且其在低分化、高转移的癌组织中表达量高;之后成功构建ANKRD49的真核表达重组质粒p3
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目的:课题组前期研究NSCLC患者组织芯片发现,在癌组织中,ANKRD49的表达高于邻近正常组织,且其在低分化、高转移的癌组织中表达量高;之后成功构建ANKRD49的真核表达重组质粒p3×Flag-CMV-14/ANKRD49,将其转染A549细胞后,发现不参与调节细胞增殖,推测可能与肺癌细胞的转移和侵袭有关;为进一步研究ANKRD49的功能,构建ANKRD49慢病毒载体并包装成病毒颗粒后感染A549和NCI-1299细胞,研究ANKRD49促进转移和侵袭的功能并对其机制进行初步研究,为下一步的研究ANKRD49在NSCLC中的功能奠定基础。方法:1.构建高表达ANKRD49的慢病毒载体LV5-ANKRD49;2.利用已构建的慢病毒载体感染NSCLC腺癌细胞系A549、NCI-H1299,使A549、NCI-H1299细胞稳定高表达ANKRD49;3.使用RT-PCR和Western blotting检测A549、NCI-H1299细胞中ankrd49mRNA表达和ANKRD49蛋白质表达;4.使用CCK-8增殖实验检测ANKRD49高表达对A549、NCI-H1299细胞增殖的影响;5.细胞划痕实验、Transwell迁移实验检测ANKRD49高表达对A549、NCI-H1299细胞迁移能力的影响;6.Transwell侵袭实验检测ANKRD49高表达对A549、NCI-H1299细胞侵袭能力的影响;7.Western blotting检测ANKRD49高表达对A549、NCI-H1299细胞中MMP-2/9表达水平的影响。结果:1.RT-PCR和Western blotting结果表明ANKRD49慢病毒载体在A549、NCI-H1299细胞中高表达,ANKRD49稳定高表达A549、NCI-H1299细胞模型构建成功;2.CCK-8增殖实验结果表明,ANKRD49高表达不影响A549、NCI-H1299细胞增殖;3.细胞划痕实验、Transwell迁移实验结果表明,ANKRD49高表达可促进A549、NCI-H1299细胞迁移能力;4.Transwell侵袭实验结果表明,ANKRD49高表达可促进A549、NCI-H1299细胞侵袭能力;5.Western blotting检测结果显示,相比于裸细胞组和空载体组,ANKRD49高表达的A549、NCI-H1299细胞中MMP-2/9表达明显增高。结论:1.成功构建了ANKRD49稳定高表达的A549、NCI-H1299细胞模型;2.ANKRD49高表达不影响A549、NCI-H1299细胞增殖;3.ANKRD49高表达可能通过增加MMP-2/9表达促进A549、NCI-H1299细胞迁移和侵袭能力。
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