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目的:通过祛毒汤含药血清干预AML-CR(急性髓系白血病完全缓解期Acute Myelogenous Leukemia-Complete Remission)患者 CD34+细胞源 DC(树突细胞Dendritic Cell)的诱导,观察DC诱导成熟前后培养物上清液中TNF-α(肿瘤坏死因子-α Tumor Necrosis Factor-α)、sTNFα-R(可溶性肿瘤坏死因子α-受体 soluble Tumor Necrosis Factor-α Receptor)的水平,探讨其与 DC 的关系,进一步探究祛毒汤干预AML-CR患者DC诱导的机制。方法:以高、中、低剂量的祛毒汤水煎剂分别于早晚各一次灌胃新西兰健康大白兔,第三天于无菌实验室心脏取血,分别制备高、中、低三种浓度的含药兔血清备用,抽取符合纳入实验标准的患者骨髓,无菌条件下用FICOLL梯度离心法分离BMNC(骨髓单个核细胞Bone Marrow Nucleated Cell),继以CD34+免疫磁珠提纯得到CD34+细胞,再以Flt-3(FMS样酪氨酸激酶-3 FMS-like tyrosine kinase-3)、IL-3(白介素-3 Interleukin-3)、TPO(血小板生成素Thrombopoietin)、SCF(干细胞生长因子Stem Cell Factor)细胞因子进行共9天的扩增,使CD34+细胞呈对数生长后进入DC诱导。在显微镜下通过直接计数法将CD34+细胞数目调整至1×106/ml,后以IFN-α(干扰素-αInterferon-α)、GM-CSF(单核-巨噬细胞集落刺激因子 Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor)、IL-4(白介素-4 Interleukin-4)、TNF-α细胞因子联合高、中、低三种不同浓度的含药兔血清共同诱导,分为祛毒汤高、中、低剂量含药兔血清+细胞因子组、正常兔血清+细胞因子组、单纯细胞因子组诱导DC,分别于诱导第0天、第6天、第9天收集上清、观察DC形态,ELISA法测TNF-α、sTNFα-R的含量,同时FCM(流式细胞仪Flow Cytometry)检测第9 天 DC 表面抗原 CD80、CD83、CD86、CDla、HLA-DR 的表达。结果:1.DC形态:观察发现随时间进展CD34+细胞逐渐出现突起,相互聚集形成集落,形成较为典型的DC形态。第0天镜下为CD34+细胞形态,3天后见细胞表面不规则,出现模糊突起呈细毛状,部分呈簇状聚集,形成少量集落,6天后胞体变大,形态不一,每个突起长短不一、有多级分枝形如树杈,与其他细胞交织,大部分融合成簇,集落数较前增多,且内含细胞增多,9天后基本成熟,形状典型。QDD+YZ(祛毒汤低剂量含药兔血清+细胞因子组)、QDZ+YZ(祛毒汤中剂量含药兔血清+细胞因子组)、QDG+YZ(祛毒汤高剂量含药兔血清+细胞因子组)组诱导之DC形态较XQ+YZ(正常兔血清+细胞因子组)、YZ(单纯细胞因子组)组典型,分支多。2.TNF-α水平:各组中TNF-α的含量都随着DC诱导成熟而下降差异明显(P<0.05);组内比较,各组中TNF-α在第0天、第6天、第9天有差异(P<0.05);组间比较,同一时间内,QDD+YZ、QDZ+YZ、QDG+YZ组与XQ+YZ、YZ组有差别(P<0.05),但XQ+YZ、YZ组间无统计学意义(P>0.05),QDD+YZ组、QDZ+YZ组、QDG+YZ组有差异(P<0.05),且QDG+YZ组明显优于QDD+YZ 组、QDZ+YZ 组(P<0.05)。3.sTNFα-R水平:各组中sTNFα-R的含量都随着DC诱导成熟而下降差异显著(P<0.05);组内比较,各组中sTNFα-R在第0天、第6天、第9天互有差异(P<0.05);组间比较,同一时间内,QDD+YZ、QDZ+YZ、QDG+YZ组与XQ+YZ、YZ组有差别(P<0.05),但XQ+YZ、YZ组间无统计学意义(P>0.05),QDG+YZ 组与 QDD+YZ、QDZ+YZ 组差别明显(P<0.05),QDD+YZ 组、QDZ+YZ 组间无差异(P>0.05)。4.DC 免疫表型:诱导第 9 天后 CD80、CD83、CD86、CD1a、HLA-DR 所有表面抗原在各组中均有表达。CD80在各组中的表达均无差异(P>0.05);CD83、HLA-DR 在 QDD+YZ、QDZ+YZ、QDG+YZ 组中表达均较 XQ+YZ、YZ组有统计学意义(P<0.05),而QDG+YZ组优于QDD+YZ、QDZ+YZ组(P<0.05),QDD+YZ、QDZ+YZ 组无差异(P>0.05),XQ+YZ、YZ 组无差别(P>0.05);CD86 在 QDD+YZ、QDZ+YZ、QDG+YZ 组中表达均较 XQ+YZ、YZ组有统计学意义(P<0.05),而QDD+YZ组优于QDZ+YZ、QDG+YZ组(P<0.05),QDZ+YZ、QDG+YZ组无统计学意义(P>0.05),XQ+YZ、YZ组无差别(P>0.05);CD1a在QDD+YZ、QDZ+YZ、QDG+YZ组中表达均较XQ+YZ、YZ 组有统计学意义(P<0.05),而QDD+YZ、QDZ+YZ、QDG+YZ组比较无明显差异(P>0.05),XQ+YZ、YZ组无统计学意义(P>0.05)。结论:1、祛毒汤含药血清能促进AML-CR患者CD34+细胞源DC的成熟,能较高表达DC表面抗原CD83、CD86、CD1a、HLA-DR。2、祛毒汤含药血清在诱导AMIL-CR患者CD34+细胞源DC成熟过程中能降低TNF-α、sTNFα-R水平,有利于DC发挥生物学效应。