高效液相色谱柱前衍生测定及研究几种氨基糖苷类抗生素的药代动力学

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高效液相色谱法是在经典液相色谱法和气相色谱法基础之上发展起来的新型分离分析技术。由于其简便、快速、灵敏、准确的特点,至今,已经在生物工程、制药工业、食品工业、环境监测、石油化工等领域获得很广泛的应用。本文建立了用反相高效液相色谱法测定几种氨基糖苷类抗生素在大鼠血浆中含量及药代动力学的方法,由综述和研究报告两部分组成,综述部分简单概述了高效液相色谱的特点、色谱技术方面的进展以及在药物分析中的应用。研究报告部分建立了血浆中奈替米星、阿米卡星、异帕米星几种氨基糖苷类抗生素的测定以及研究了这几种药物在休内的动力学的新方法,包括:柱前衍生反相高效液相色谱荧光法研究奈替米星、阿米卡星、异帕米星几种氨基糖苷类抗生素在大鼠体内的动力学。本论文共分为五章。第一章:绪论部分从高效液相色谱的特点、色谱技术方面的进展以及在氨基类抗生素在HPLC分析技术的研究进展与应用现状。第二章:建立了一种简便、灵敏的氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测血浆中奈替米星的新方法,同时研究了其药代动力学。对色谱条件进行了优化,采用ZORBAX Eclipse XDB-C8 (150mm×4.6mm,5μm)柱,流动相为乙腈-水(85:15),流速1.0 mL·min-1,荧光检测波长分别位于Ex=265 nm和Em=315 nm,回收率为96.62-100.84%(n=3),对奈替米星检测的线性范围为0.045-8.88μg.mL-1,相关系数为0.9993,方法的日内与日间精密度分别低于2.19%与3.27%,最低检出限(S/N=3,进样量为20μL)与定量限(S/N=10)分别为0.01和0.03μg·mL-1。30μL奈替米星血浆溶液已满足该药含量的测定以及药物代谢的研究。方法简便、快速、灵敏,为大鼠体内血样动力学的研究提供了可靠的生物分析手段。第三章:建立了大鼠血浆中的阿米卡星的氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测分析法,并用于测定静脉给药后大鼠血浆中浓度的动态变化及药动学参数。对色谱条件进行了优化,采用ZORBAX Eclipse XDB-C8 (150 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-水(68:32),流速1.0 mL·min-1,荧光检测波长分别位于Ex=265 nm和Em=315 nm,异帕米星做内标,方法的线性范围为0.045-8.88μg·mL-1 (r=0.9993),日内与日间精密度分别低于2.19%与3.27%,最低检出限(S/N=3,进样量为20μL)与定量限(S/N=10)分别为0.01和0.03μg·mL-1,回收率为96.62-100.84%(n=3)。50μL阿米卡星血浆溶液已满足它含量的测定以及药物代谢的研究。本方法简便、快速、灵敏,可以定量检测大鼠静脉注射后阿米卡星在血中的浓度并提供了可靠的生物分析方法。第四章:建立一种简便、灵敏的氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)柱前衍生荧光检测反相高效液相色谱法测定血浆中异帕米星的方法,阿米卡星为内标。采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱,流动相为乙腈-水(68:32)。系统研究了pH值、反应时间及衍生化试剂用量对衍生反应的影响,确定最佳反应条件。血浆中异帕米星的线性范围为0.625-15μg·mL-1;检测限(S/N=3,进样量20μL)为0.10μg·mL-1。日内与日间精确度均小于5%。实验结果表明该方法选择性好,灵敏度高,准确度和精密度都较好。
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