论文部分内容阅读
热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）在细胞的抗原加工提呈过程中也起重要作用。外源HSPs能作用于树突状细胞（dendritic cell，DC）表面的CD91促进DC成熟。在肿瘤内HSPs可以与畸变蛋白质结合形成HSPs-肿瘤肽复合物，从肿瘤细胞提取的HSPs-肿瘤肽复合物能诱导产生针对来源肿瘤的免疫应答，作为一种安全有效的肿瘤疫苗日益受到重视，但肿瘤标本量少，而HSPs-肿瘤肽复合物量更少限制其应用。DC是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞（antigen presenting cell，APC），肿瘤抗原负载的DC可作为肿瘤疫苗诱导抗瘤免疫，既能将肿瘤抗原有效转运至DC并能活化DC抗原载体的研究与应用具有重要意义。 目的：本实验室分别制备榄香稀复合瘤苗抗原(HTA)与卡介苗HSP70(HSP70BCG)，构建HTA-HSP70BCG复合物，免疫小鼠后对HTTA的攻击具有明显的保护效应。本实验用HTA-HSP70BCG在体外冲击DC，观察HTA-HSP70BCG对DC的冲激作用及其抗原提呈功能的影响，探讨肿瘤抗原-HSP70BCG瘤苗诱导抗瘤免疫的机制。 方法：无菌取小鼠脾脏、骨髓制成细胞悬液，破红细胞，用含有GM-CSF和IL-4（浓度为100ng/ml）的1640培养基调成所需浓度2×107/ml。37℃，5％CO2培养2小时。洗掉不黏附细胞后黏附细胞继续培养16-18小时。将培养的粘附细胞用1640培养基（不含血清）冲洗，洗出半粘附细胞，即富含树突状细胞的细胞组分简称树突状细胞。正常小鼠脾、骨髓DC在体外用HTA-HSP70BCG、HTA、HSP70BCG进行刺激继续，培养3天。用MTT法测DC及其刺激的不粘附细胞的增殖活性，用电镜观察其形态学改变，用流式细胞仪测内吞FITC标记的dextran的DC的百分率。 结果：1：HTA-HSP70BCG对正常小鼠DCs的冲激作用：在GM-CSF和IL-4存在的条件下用HTA-HSP70BCG、HTA、HSP70BCG冲激的DC都增殖脾树突状细胞增殖指数分别为，氏厂HSp7o。冲激组为2.11驻0.121、Hr^冲激组为1.135士0.130、HSp70acc冲激组为1.269士0.029。骨髓树突状细胞增殖指数分别为，HT厂HSP70、冲激组为2.107士0.113、氏;冲激组为z一2肚0.127、HSP70‘。冲激组为1.271士0.014。2、Dc的形态学改变:电镜照片显示经HT^一HSP7O。处理的DC在形态上与对照组相比更加成熟如:细胞表面有大量皱摺和不规则胞浆突起，胞浆中细胞器丰富，富含线粒体，少量溶酶体，可以见到粗面内质网及高尔基器，细胞核较大，不规则，常染色质较多，异染色质较少且边集。3、H认eeHSP7o。冲激的DCs对脾不粘附细胞的激活作用:冲激的DCs刺激的细胞增殖明显强于未冲激的ocs刺激的细胞。脾树突状细胞加不粘附细胞培养的增殖指数:氏A一HSP7O。冲激组为2.004士0.018、HTA冲激组为1.137肚0.069、Hsp7o‘。冲激组为1.285士0.014。骨髓树突状细胞加不粘附细胞培养的增殖指数分别为，HT^一HSP7o、冲激组为1.927士0.073、氏，冲激组为1.311士0.113、HSp70、冲激组为1.162土0.036。4、HT厂H叨o。冲激的DC内吞FITC标记的dextran能力:取培养3天的脾、骨髓DC细胞，并调浓度至2 x 10亏m1，加入FxTC一Dextran lmg/ml在37，C放置12omin，流式细胞仪测定，判断DC抗原摄取能力。摄取FITC一Dextran的DC的百分率分别为:HT厂HSp7o‘。冲激的脾DC55.20、H下;冲激的脾DC为0.54、HSp7o‘。冲激的脾DC为0.25。氏厂HSp70二冲激的骨髓DC为58.61、H丁;冲激的骨髓DC为0.25、HSp7o二。冲激的骨髓DC 0.25。 结论:结果表明HT厂HSP70Bc。能够激活脾脏DC和骨髓DC，HT厂HSP70Bc。冲激的DC比单用HT;或HSP70Bc。冲激的DC有更强的刺激不粘附细胞和摄取抗原的能力。HT^一HsP7o‘。可作为肿瘤疫苗诱导对肿瘤细胞的免疫应答。