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本论文共三章,第一章针对杆状病毒的研究现状作了综述报道,第二章对棉铃虫核型多角体病毒(HearNPV)orf50(Ha50)的功能进行了初步解析,第三章制备了HA51,HA52的多克隆抗体为orf51和orf52的研究打下了基础。
第一章:对杆状病毒的分类特征、形态结构、病毒复制周期、基因组结构等分子学研究背景及杆状病毒的应用等进行了系统的综述；最后也对本论文研究的目的和意义进行了简要的介绍。
第二章:对HearNPVG4株Ha50进行了初步研究。Ha50位于HearNPVG4基因组41848至42363,共516bp,编码171个氨基酸。除Xc以外,Ha50同源基因存在于大多数杆状病毒中,比如Ac,Bm,Op,Ld,Se,同源性分别为:42％,42％,41％,44％,44％。研究表明,在病毒感染后4小时细胞RNA样品中可以最先检测到Ha50基因的mRNA,并持续到感染末期。3’RACE和5RACE实验表明Ha50转录起始位点和转录终止位点分别位于Ha50起始密码子ATG前231bp处和Ha50终止密码子TAA后42bp处；Ha50转录起始位点序列为CATG,表明Ha50是病毒早期基因。对Ha50进行了克隆和原核表达及抗体制备。Westernblot分析显示,Ha50的表达产物大小约为23KD,HA50从12小时开始表达。Westernblot分析还显示HA50可能是病毒的非结构蛋白。亚细胞定位实验显示,HA50-eGFP融合蛋白分布在病毒感染的HzAM1细胞的细胞质和细胞核中。通过构建缺失及回复Ha50基因的重组Bacmid,发现Ha50对病毒在HzAM1细胞中的复制是非必需的；生物测定实验表明缺失Ha50会增强病毒的口服感染性。
第三章:制备了HA51和HA52的多克隆抗体。构建原核表达载体pET-28a-Ha51,pET-28a-Ha52在大肠杆菌BL21菌株中大量表达His-HA51和His-HA52蛋白,进行纯化和免疫并获得HA51和HA52的抗血清。