【摘 要】
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催产素（Oxytocin,OT）和血管加压素（Vasopressin,VP）是最古老的神经肽,分子结构高度保守,广泛分布于各门类动物。在脊椎动物中,OT/VP参与代谢、渗透调节、复杂的社会行为、生殖、记忆和学习等过程;而在无脊椎动物中,二者结构无法明确区分,合称为OT/VP样神经肽家族。目前,关于OT/VP样神经肽及其受体对无脊椎动物的生殖调控研究鲜有报道。拟穴青蟹（Scylla paramamo
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催产素（Oxytocin,OT）和血管加压素（Vasopressin,VP）是最古老的神经肽,分子结构高度保守,广泛分布于各门类动物。在脊椎动物中,OT/VP参与代谢、渗透调节、复杂的社会行为、生殖、记忆和学习等过程;而在无脊椎动物中,二者结构无法明确区分,合称为OT/VP样神经肽家族。目前,关于OT/VP样神经肽及其受体对无脊椎动物的生殖调控研究鲜有报道。拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是泛太平洋-印度洋重要的经济蟹类,也是我国养殖产量最高的海水蟹类,具有重要的经济价值。本文以拟穴青蟹为研究对象,克隆、鉴定获得SpOT/VP-like和SpOT/VPR-like,检测二者的组织分布及时序表达,并通过离体和在体实验探究SpOT/VP信号系统对卵黄发生的调控作用。主要结果如下:1)SpOT/VP-like由158个氨基酸组成,含一个信号肽、一个成熟九肽（CFITNCPPG）、一个切割位点（GKR）和一个后叶激素运载蛋白结构域（Neurophysin）。SpOT/VPR-like由435个氨基酸组成,含7个疏水肽段形成的α螺旋跨膜区,为G蛋白耦联受体。多重序列比对及系统发育分析显示,SpOT/VP-like和SpOT/VPR-like分别与其他甲壳动物OT/VP和OT/VPR高度同源,属于OT/VP信号系统。配体-受体结合实验表明,SpOT/VP-like可与靶细胞质膜上SpOT/VPR-like结合,通过抑制腺苷酸环化酶活性降低胞内cAMP水平,完成信号的跨膜传递。2)RT-PCR显示,SpOT/VP-like转录本主要分布在神经系统、中肠和鳃,卵巢与肝胰腺也有少量分布;SpOT/VPR-like转录本在各组织广泛分布。提示SpOT/VP信号系统可以神经内分泌方式参与调控多种生理功能。原位杂交显示,SpOT/VP-like可能由卵母细胞和滤泡细胞合成,以自分泌/旁分泌方式调控卵黄发生。此外,SpOT/VP-like和SpOT/VPR-like的时序表达模式与卵黄发生呈负相关关系,提示SpOT/VP信号系统可能抑制卵黄发生。3)肝胰腺/卵巢外植体培养,添加合成SpOT/VP-like可抑制肝胰腺中SpVg和卵巢中Sp VgR表达;且相同条件处理可抑制肝胰腺和卵巢中雌二醇（17β-estradiol,E2）释放。提示SpOT/VP-like可通过抑制E2释放而抑制卵黄发生。长期注射合成小肽显著抑制肝胰腺中SpVg表达,且降低血淋巴中E2含量（仍维持正常生理水平）;此外,虽然卵巢中SpVg、Sp VgR表达量无显著降低,但均存在抑制趋势。组织学显示,注射合成小肽抑制卵巢发育,卵母细胞直径显著短于对照组,即卵黄物质的合成及卵母细胞对卵黄物质的吸收积累被抑制。离体RNA干扰后添加合成小肽,dsOT/VPR干扰组的SpVg表达量显著升高,小肽抑制效果被解除,说明敲降受体即为SpOT/VPR-like。综上所述,SpOT/VP-like可能以神经内分泌及自分泌/旁分泌方式作用于卵巢/肝胰腺,通过抑制E2释放而抑制卵黄蛋白原合成,影响卵黄发生。本文有助于丰富无脊椎动物,特别是甲壳动物OT/VP信号系统的生殖功能研究,可为拟穴青蟹资源养护及养殖技术开发等提供科学依据。
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