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心脏骤停后心肺复苏中脑功能能否恢复是衡量复苏成败的关键。目前,国内外的研究比较集中在以脑复苏为重点的后期复苏或延续生命支持。神经元缺氧损伤是心跳骤停脑缺血缺氧损伤的重要病理生理过程,主要包括低氧损伤继发坏死,自由基损伤和细胞内钙超载的再灌注损伤,兴奋性氨基酸释放,神经元凋亡等。6阿片受体的器官保护作用是近年来阿片受体研究的热点,研究发现6阿片受体与神经元缺血缺氧损伤有密切的关系。DADLE是人工合成的一种非选择性6阿片受体激动剂,作为研究的一种工具药物可以同时激动δ1和δ2受体。在体外培养神经元实验中,研究数据表明δ阿片受体激动剂对兴奋性谷氨酸造成的神经元损伤具有保护作用。这使得6阿片受体激动剂成为一种潜在的神经保护药物。但是DADLE在整体动物脑缺血损伤中的作用目前尚存在争议。有学者认为DADLE具有神经保护作用,另外一些学者则认为DADLE对缺血性脑损伤无明显保护作用。因此研究阐明δ阿片受体激动剂在大鼠缺血脑损伤中的保护作用机制。对于临床上寻找新的有效方法以减少脑缺血后的神经并发症具有重要的理论和现实意义。
目的:研究delta阿片受体激动剂在大鼠缺血脑损伤中的保护作用机制,以期为缺血性脑损伤的治疗提供一条可能的新思路。
方法:基于此,本研究采用四血管阻断方法(Pulsinelli-4VO法)制备大鼠全脑缺血模型,建立原代皮层神经元缺氧无糖损伤(OGD)模型,通过采用F1uoro-Jade B和Nissl染色来检测海马脑片中死亡和存活的神经元; MTT、LDH、Hoechst染色、流式细胞仪检测活性氧等技术观察DADLEE对于神经元缺氧无糖损伤的保护作用;以及采用受体阻断和信号通路阻断技术,研究DADLEE脑保护作用的受体机制及其对下游信号通路的调节机制。
结果:(1)Delta阿片受体激动剂DADLE对于大鼠全脑缺血损伤具有保护效果,5mM时保护效果最好;该保护作用可被δ阿片受体拮抗剂Natridole部分拮抗。(2)DADLKE对于缺氧无糖(OGD)损伤处理的神经元具有保护效果。浓度为100nM时保护效果最好。但是在高浓度时出现损伤作用(10uM);阿片受体拮抗剂Natridole可以完全拮抗DADLE在OGD损伤中的神经元保护作用。(3)DADLE预处理显著增加pERK的蛋白表达且同时降低pp38的蛋白表达,该作用可部分的被Natridole所阻断。DADLE通过对pERK and pp38的动态调节从而在神经元OGD损伤中起到保护神经元的作用:p38蛋白磷酸化在神经元OGD损伤中起着损伤作用,而ERK蛋白的磷酸化则在DADI。E保护神经元OGD损伤中起着重要的保护作用。这两种蛋白信号通路之间存在着相互作用。(4)DADLE预处理显著增加抗凋亡蛋白Bc1-2的表达且同时降低凋亡蛋白Bax的表达,该作用可部分的被Natridole所阻断。(5)DADLE预处理可以显著降低缺氧无糖损伤神经元的活性氧水平。
结论:DADLE对于大鼠全脑缺血性脑损伤和缺氧无糖(OGD)损伤处理的神经元具有明显的保护效果,其作用具有剂量依赖性。DADLE的这种脑保护作用的机制主要是激活了delta受体,但同时有其它机制参与。