目的： 1．构建NOR<,1>基因的真核表达载体。2．分析NOR<,1>基因对肝癌细胞系HepG2生物学活性的影响。3．探讨NOR<,1>基因对肝癌细胞IL-8水平的影响。 方法： 1．NOR<,1>基因的真核表达载体的构建及鉴定。 根据NORl基因的酶切位点，选用。BamH I和 Xho I作为克隆位点，再从NOR<,1>基因的完整阅读框架序列的两端设计含BamH I和Xho I酶切位点的引物，扩增含NOR<,1>基因的完整阅读框架序列。扩增产物纯化后用BamH I和Xho I酶过量酶切，低熔点琼脂糖凝胶回收，再与经BamH I和Xho I双酶切后的pcDNA3.1(+)质粒重新连接，转化JM109菌，小量抽提质粒，双酶切鉴定阳性克隆，然后进行DNA测序鉴定。 2．NOR<,1>基因转染和转染克隆筛选。 用常规的细胞培养方法培养HepG2细胞，运用脂质体介导的方法把NOR<,1>基因重组体(pcDNA3.1(+)／NORl)转染入HepG2中，48h后用含有G418的完全培养基筛选细胞阳性克隆，并用逆转录PCR (RT-PCR)法鉴定NOR<,1>基因的重表达。此外，通过台盼蓝实验、MTT实验、流式细胞仪等分析NOR<,1>基因对肝癌细胞系HepG2生物学活性的影响。 3．IL-8表达水平的检测。 采用RT-PCR法检测转染后：HepG2中IL-8mRNA的表达水平及用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-8的表达水平。 结果： 1．构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/NOR<,1>用限制性核酸内切酶分析和DNA序列分析证实NOR<,1>基因已经成功连接于pcDNA3.1(+)载体。 2．台盼蓝排斥实验结果显示转染组和对照组活细胞率均≥90％，未见脂质体转染细胞后产生的明显副作用。 3．MTT实验结果表明空白对照组和转染空载体组的吸光度值明显较转染重组质粒pcDNA3.1(+)／NOR<,1>组高，吸光度值A+SD分别为0.8154±0.023，0.7954±0.018，0.6184±0.024。统计学分析(SNK-q检验，p<0.05)。 4．流式细胞仪检测结果显示转染pcDNA3.1(+)／NOR<,1>组的细胞凋亡率为32.9％，转染空载体pcDNA3.1(+)组的细胞调亡率为4.11％。且发现转染重组质粒后HepG2细胞从G<,0>／G<,1>期进入S期明显延缓。 5．ELISA检测细胞培养上清液中IL-8水平，转染了NOR,,1>基因组IL-8的表达水平明显高于转染空载体组和空白组(SNK-q检验p<0.05)，而转染空载体组和空白组无显著差异(p>0.05)。 结论： 1．构建了NOR<,1>基因的真核表达载体。 2．重组质粒pcDNA3.1(+)／NOR<,1>能在肝癌细胞系HepG2表达，且能影响HepG2细胞的生长。 3．NOR<,1>基因能诱导HepG2细胞IL-8水平表达增高。